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作者：李宏丽;范林林;康霞;韦海涛;李丽;何文亚;
单位：河南大学淮河医院神经内科;河南大学护理与健康学院;河南大学淮河医院胸外科;河南大学基础医学院;
摘要：目的 探究LINC00626通过Janus激酶(JAK)1/信号转导和转录激活因子(STAT)3/KH型剪切蛋白(KHSRP)信号轴调控胶质瘤恶性进展及分子机制。方法 细胞功能实验：取胶质瘤细胞系A172、U251、U118MG、SHG-44及人正常星形胶质细胞系(NHA),采用实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测LINC00626、KHSRP mRNA表达。对胶质瘤细胞系进行慢病毒稳定转染，分为：sh-NC组、sh-LINC00626组、Vector组、LINC00626组、sh-LINC00626+Vector组和sh-LINC00626+KHSRP组。细胞计数试剂盒(CCK)-8实验、细胞菌落形成实验、细胞划痕实验、Transwell小室迁移/侵袭实验检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力等生物学特征。采用Western印迹法检测稳定转染胶质瘤细胞中KHSRP蛋白表达。病例组织标本实验：收集手术切除且经病理检验确诊为胶质瘤的144例肿瘤组织(实验组)及同期行内减压术获得的正常脑组织(对照组),采用qRT-PCR法检测各组组织标本中LINC00626、KHSRP mRNA表达。裸鼠体内实验：皮下荷瘤：将32只裸鼠按随机数字表法分为sh-NC-1组、sh-LINC00626-1组和Vector-1组、LINC00626-1组，每组8只，皮下注射稳转慢病毒的A172和SHG-44细胞。分别于第20天(敲降组)和第22天(过表达组)处死并解剖，分别测量各组裸鼠的肿瘤体积/重量。尾静脉注射肺转移模型：将20只裸鼠按随机数字表法分为sh-NC-1组、sh-LINC00626-1组和Vector-1组、LINC00626-1组，每组5只，尾静脉注射稳转慢病毒的A172和SHG-44细胞，分别于第35天(敲降组)和第42天(过表达组),以颈椎脱臼法处死裸鼠，并计数各组肺部转移病灶数目。分子机制实验：qRT-PCR及Western印迹实验检测KHSRP蛋白对JAK/STAT信号通路相关mRNA及蛋白水平影响。将LINC00626进行慢病毒敲降与KHSRP过表达后共转染到A172和U251细胞进行拯救实验，通过CCK-8、Transwell小室实验验证KHSRP可逆转敲降LINC00626后对神经胶质细胞瘤细胞增殖、迁移/侵袭的抑制作用。结果 细胞功能实验：与NHA相比，LINC00626和KHSRP在胶质瘤细胞系(A172、U251、U118MG和SHG-44)中表达量均显著上调(P<0.01)。与sh-NC-1组相比，sh-LINC00626-1组A172、U251细胞的细胞增殖率、细胞菌落形成数、细胞迁移、侵袭数明显降低，过表达组则明显相反(P<0.01)。病例组织标本实验：与对照组相比，实验组LINC00626、KHSRP mRNA表达水平明显升高(P<0.01)。裸鼠实验：皮下荷瘤实验：饲养第20天时，与sh-NC-1组相比，sh-LINC00626-1组肿瘤体积和重量、细胞增殖指数明显下降(P<0.01);饲养第22天时，与Vector-1组相比，LINC00626-1组中则明显相反(P<0.01)。尾静脉注射肺转移模型实验：饲养第35天时，与sh-NC-2组相比，sh-LINC00626-2组中肺转移病灶数目明显下降(P<0.01);饲养第42天时，与Vector-2组相比，LINC00626-2组中则明显相反(P<0.01)。分子机制实验：与sh-NC组相比，sh-LINC00626组JAK1、p-JAK1、STAT3 mRNA和蛋白表达量均显著降低，过表达组则明显相反(P<0.05)。结论 LINC00626在胶质瘤中发挥肿瘤启动子的作用，通过JAK1/STAT3/KHSRP信号轴，促进胶质瘤转移的恶性进程。
关键词：胶质瘤;;LINC00626;;Janus激酶(JAK)1/信号转导和转录激活因子(STAT)3;;KH型剪切蛋白(KHSRP);;增殖;;侵袭;;转移
基金资助：河南省教育厅项目(No.232102230092);; 河南省高等学校重点科研项目(No.23B320007,25B320014);; 河南省科技厅科技攻关项目(No.252102311055,252102311053)
