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作者：冷雪飞;戴承兵;何易;金玉娥;温忆敏;
单位：上海市疾病预防控制中心化学品毒性检定所;
摘要：目的 以丙烯酰胺和环氧乙烷加合物为目标物建立血红蛋白N端烷基化定量检测方法。方法 抗凝全血经冻融破裂红细胞释放血红蛋白后，吸取250μL溶血液加入稳定同位素内标物和Edman降解衍生剂荧光素异硫氰酸酯在37℃、800 r/min条件下涡旋混匀反应16 h,将大分子血红蛋白N端烷基化加合物衍生同步降解为带有荧光素标签的缬氨酸加合物小分子。衍生后的反应液经乙腈沉淀蛋白，离心后的上清液使用离子交换和反相保留双重模式的混合型阴离子固相萃取柱提取净化目标物，洗脱液在55℃氮气环境吹干后用乙腈水溶液(1∶1,V/V)复溶、过滤膜后上机分析。采用Waters ACQUITY HSS T3色谱柱(100 mm×2.1 mm, 1.8μm)、超高效液相色谱-电喷雾三重四极杆质谱联用仪器分析技术和标准品同步衍生的同位素稀释内标定量法，对人全血中丙烯酰胺和环氧乙烷血红蛋白加合物的含量进行定量检测。结果 该方法丙烯酰胺加合物和环氧乙烷加合物的检测限为0.1和0.2 pmol/g Hb,定量限可低至0.4和0.8 pmol/g Hb;标准工作曲线线性范围宽，线性相关系数(r)>0.999;两种加合物检测日内精密度和日间精密度均不超过7.2%;与标准加入法比较，丙烯酰胺加合物和环氧乙烷加合物的定量结果偏差分别为+15%和-5.8%。结论 本方法检测灵敏度高、稳定性好、定量结果准确，适用于普通人群丙烯酰胺和环氧乙烷血红蛋白加合物的生物监测以及职业暴露或突发事件意外暴露的检测，并适用于多种血红蛋白N-缬氨酸烷基化加合物的定性定量分析。
关键词：内暴露检测;;血红蛋白加合物;;Edman降解;;液相色谱三重四极杆质谱联用技术
