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作者：王慧;王明明;张杰琼;王娇;李颖;王大燕;王世文;卢学新;董婕;
单位：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室;
摘要：本研究旨在建立一种快速、准确的禽流感病毒灭活效果评价方法。传统方法通过鸡胚繁殖或细胞培养对禽流感病毒灭活效果进行定量检测，但存在操作时间长且无法客观反映残余病毒量的局限性。实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR)虽可作为直接定量消毒剂作用后的残余病毒量的一种方法，但无法评估病毒的感染性。本研究将RT-qPCR技术与酶法预处理相结合，对中低效消毒剂新洁尔灭和75%乙醇灭活H9N2病毒的效果进行评估。结果显示，333 U/mL的蛋白酶K处理30 min，可有效降解受损的病毒囊膜蛋白；随后使用0.2 mg/mL的RNase A处理30 min，可降解裸露的病毒RNA。1%和0.25%的苯扎溴铵分别作用5 min后，经酶法预处理联合RT-qPCR检测，病毒基因组水平分别降低5.67和5.62 lg拷贝数/μL;75%乙醇作用1 min，病毒基因组水平降低5.65 lg拷贝数/μL；作用时间延长至5 min时，病毒基因组水平降低至检测值以下。本研究通过RT-qPCR联合酶法预处理建立了定量评价苯扎溴铵和75%乙醇有效灭活H9N2禽流感病毒的方法 。
关键词：禽流感病毒;;H9N2亚型;;灭活评估;;实验室生物安全
基金资助：“十三五”国家科技重大专项（项目号：2018ZX10201002）,题目：基于海量多元大数据的突发急性传染病时空多尺度预测预警模型与应用示范的构建~~
