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作者：陈星宇;姜雅倩;宋春丽;宋臣阳;王晴;
单位：安徽农业大学动物医学院;
摘要：∶本研究在鸭坦布苏病毒（Duck Tembusu virus, DTMUV）诱导小鼠神经母细胞瘤细胞（Neuro-2a）不完全自噬促进病毒复制的基础上，鉴定诱导Neuro-2a细胞自噬的病毒蛋白，探究病毒非结构蛋白NS1、NS3在诱导Neuro-2a细胞不完全自噬中的作用。用载体pCMV14-Flag构建DTMUV十个编码蛋白基因的真核表达质粒，分别将其转染至Neuro-2a细胞，Western blot检测病毒蛋白和自噬标志性蛋白的表达，明确诱导Neuro-2a细胞自噬的病毒蛋白，并通过透射电镜、激光共聚焦、Western blot等方法进一步验证以上病毒蛋白在诱导Neuro-2a细胞不完全自噬中的作用。结果显示，本研究成功构建了DTMUV十个编码蛋白基因的真核表达质粒，且能够在Neuro-2a细胞中正常表达；非结构蛋白NS1和NS3能显著增加LC3-Ⅱ和P62蛋白水平，促进Neuro-2a细胞中自噬体形成，诱导Neuro-2a细胞发生不完全自噬，且NS1和NS3蛋白诱导的Neuro-2a细胞不完全自噬具有剂量和时间依赖性。综上所述，本研究证实DTMUV非结构蛋白NS1、NS3是诱导Neuro-2a细胞不完全自噬的关键蛋白，为进一步研究DTMUV的致病机制奠定基础。
关键词：鸭坦布苏病毒;;非结构蛋白NS1;;非结构蛋白NS3;;Neuro-2a细胞;;不完全自噬
基金资助：安徽省高等学校科学研究项目(项目号∶2024AH050438),题目∶坦布苏病毒感染对小鼠血脑屏障功能的影响及机制研究;; 安徽农业大学引进和稳定人才科研基金项目(项目号∶rc392012),题目∶鸭坦布苏病毒穿越小鼠血脑屏障机制研究~~
