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作者：各思雨;樊剑鸣;滕蔓;郑鹿平;刘金玲;韩放;张卓;张多;罗琴;赵东;柴书军;罗俊;
单位：郑州大学公共卫生学院;河南省农业科学院动物疫病防控研究所/中英禽病国际研究中心;龙湖现代免疫实验室;河南科技大学动物科技学院功能微生物与畜禽健康实验室;河南牧业经济学院动物医药学院;
摘要：马立克病（Marek’s disease,MD）是由马立克病病毒（Marek’s disease virus,MDV）感染引起的一种危害严重的家禽免疫抑制病与肿瘤病，给全球养殖业造成巨大经济损失。尽管MD疫苗免疫对该病具有显著防控效果，但长期的免疫压力不断促进MDV毒力增强及变异。近年来，新出现的MDV特超强毒株（Very virulent plus MDV,vv+MDV）和特超强MDV(Hypervirulent MDV,HV-MDV)变异株已突破经典MD疫苗的免疫保护，亟需研发新一代高效疫苗。本文以2021年分离鉴定的HV-MDV变异株HNXZ05为研究对象，利用CRISPR/Cas9基因编辑技术，成功构建了一株meq基因编辑缺失的疫苗候选毒株XZ05Δmeq。经PCR鉴定、DNA测序分析、间接免疫荧光实验（IFA）、实时荧光定量PCR(qPCR)以及连续传代分析，证实该毒株的meq基因已被完全编辑缺失、稳定传代后无回复突变。动物免疫保护评价实验显示，用候选疫苗株XZ05Δmeq免疫SPF鸡，对HV-MDV变异株HNSQ01的攻击可提供82.4%的免疫保护；与阴性对照组相比，免疫攻毒组实验鸡的体重及免疫器官指数均未受到显著影响。上述数据表明，XZ05Δmeq可作为MD疫苗候选毒株，用于进一步开发新型高效的MD疫苗，以应对当前鸡群HV-MDV变异株流行带来的防控新挑战。
关键词：马立克病;;meq基因;;基因编辑;;CRISPR/Cas9;;新型疫苗;;免疫保护
基金资助：国家重点研发计划(项目号:2023YFE0106100),题目:中英禽病防控技术创新联合实验室;; 国家自然科学基金(项目号:U21A20260),题目:鸡马立克病病毒遗传进化与新型疫苗毒株设计的分子基础;; 河南省杰出青年科学基金(项目号:232300421009),题目:家禽免疫抑制病与肿瘤病的流行病学研究;; 河南省农业科学院自主创新项目(项目号:2024ZC096),题目:鸡马立克病基因缺失疫苗株的表型鉴定和免疫评价;; 河南省农业科学院基础性科研工作项目(项目号:2024JC16),题
