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作者：李晨雨;马琦;王冰丹;王菲;冯霞;张晓光;李红霞;马晶;郝彦哲;李淑英;
单位：华北理工大学基础医学院,河北省慢性疾病基础医学重点实验室;中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所,传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室;华北理工大学公共卫生学院;
摘要：本研究开发了一种高效且精准的伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus, PRV）中和抗体效价检测新方法。通过同源重组和CRISPR-Cas9技术，将桡足纲绿色荧光蛋白（copepod Pontellina plumata Green Fluorescent Protein,copGFP）基因表达盒精确嵌入PRV基因组的UL40/41区域，经过多轮筛选与纯化，成功构建了重组病毒PRV-copGFP。生长特性对比实验表明，PRV-copGFP与野生型PRV-Bartha之间无显著差异（P>0.05）。借助CTL-ImmunoSpot?S6仪器计数表达copGFP的细胞数目，确定了最佳观测时间和最佳病毒滴度。该方法可精确计算中和抗体效价，并通过传统噬斑减少中和试验（Plaque reduction neutralization test, PRNT）进行验证。与传统方法相比，本检测方法将检测窗口缩短至10h，且通量显著提升。本方法在快速评估PRV中和抗体效价方面具有显著优势，可为PRV疫苗研发、疾病防控及相关研究提供有力的技术支持。
关键词：伪狂犬病病毒(PRV);;中和抗体效价;;桡足纲绿色荧光蛋白(copGFP);;重组病毒;;快速检测
基金资助：国家重点研发计划项目（项目号：2024YFC2309804）,题目：人源化抗EBV单克隆抗体和EBV疫苗研发~~
