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作者：胡晓雪;艾霄文;杨安娜;张永兰;
单位：重庆理工大学药学与生物工程学院制药工程系;
摘要：目的：探讨异菌脲（Ipr）对小鼠精母细胞GC-2铁死亡的影响，并阐明其可能的作用机制。方法：采用噻唑蓝（MTT）法检测0、0.001、0.010、0.100、1.000、10.000和100.000μmol·L~(-1) Ipr处理24 h后GC-2细胞活性。另取GC-2细胞，分为空白对照组、1.0μmol·L~(-1) Ipr组、2.5μmol·L~(-1)Ipr组和5.0μmol·L~(-1) Ipr组（分别加入终浓度为0、1.0、2.5和5.0μmol·L~(-1)的Ipr溶液处理24 h）。采用荧光显微镜观察细胞中活性氧（ROS）生成和线粒体膜电位；采用试剂盒检测超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）水平及还原型谷胱甘肽（GSH）/氧化型谷胱甘肽（GSSG）比值，Western blotting法检测Ipr暴露后各组GC-2细胞中铁死亡相关蛋白表达水平，免疫荧光法检测各组GC-2细胞中血红素加氧酶1(HO-1)蛋白荧光强度。结果：MTT法，与0μmol·L~(-1) Ipr组比较，1.000、10.000和100.000μmol·L~(-1) Ipr组GC-2细胞活性明显降低（P<0.01），后续实验选择1.0、2.5和5.0μmol·L~(-1) Ipr作用GC-2细胞。荧光检测法，与空白对照组比较，2.5和5.0μmol·L~(-1) Ipr处理GC-2细胞可促进ROS生成并降低线粒体膜电位；1.0μmol·L~(-1) Ipr组GC-2细胞中MDA水平和SOD活性及GSH/GSSG比值均无明显变化，差异无统计学意义（P>0.05）,2.5和5.0μmol·L~(-1) Ipr组GC-2细胞中MDA水平明显升高（P<0.05或P<0.01）, SOD活性和GSH/GSSG比值明显降低（P<0.01）。Western blotting法，与空白对照组比较，作用24 h后1.0μmol·L~(-1) Ipr组GC-2细胞中谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)和铁蛋白重链1(FTH1)蛋白表达水平均无明显变化，差异无统计学意义（P>0.05），作用24 h后2.5和5.0μmol·L~(-1) Ipr组GC-2细胞中GPX4和FTH1蛋白表达水平均明显降低（P<0.05或P<0.01），作用24 h后1.0、2.5和5.0μmol·L~(-1) Ipr组GC-2细胞中HO-1蛋白表达水平均明显升高（P<0.01）。免疫荧光法，与空白对照组比较，1.0、2.5和5.0μmol·L~(-1) Ipr组GC-2细胞中HO-1蛋白荧光强度明显增强。结论：Ipr导致小鼠精母细胞GC-2铁死亡，其机制可能与上调HO-1蛋白表达以及下调GPX4和FTH1蛋白表达有关。
关键词：铁死亡;;小鼠精母细胞GC-2;;异菌脲;;谷胱甘肽过氧化物酶4;;铁蛋白重链1;;血红素加氧酶1
基金资助：国家自然科学基金青年科学基金项目（81803800）;; 重庆市科技局自然科学基金项目（cstc2018jcyjAX0529,CSTB2023NSCQ-MSX0469）
