来源：期刊VIP网 时间：
作者：李亚萍;谭春艳;赵璐洁;赵嘉怡;李婷;杨晓;杨晓云;
单位：山东第二医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系;山东第二医科大学基础医学院智能诊疗与分子疾病协同创新重点实验室;山东第二医科大学基础医学院生理学系;山东第二医科大学护理学院护理学系;
摘要：目的：探讨溶血磷脂酸（LPA）联合6-羟基多巴胺（6-OHDA）对SH-SY5Y细胞凋亡的诱导作用，并阐明其相关作用机制。方法：采用100μmol·L~(-1) 6-OHDA建立帕金森病（PD）细胞模型，选用SH-SY5Y细胞、PC12细胞和N2a细胞，分为对照组（仅用不完全培养基）、4μmol·L~(-1) LPA组、100μmol·L~(-1) 6-OHDA组、 4μmol·L~(-1) LPA+100μmol·L~(-1) 6-OHDA组、 10μmol·L~(-1) LPA组和10μmol·L~(-1) LPA+100μmol·L~(-1) 6-OHDA组，处理24 h。采用噻唑蓝（MTT）法检测各组SH-SY5Y细胞活性，异硫氰酸荧光素标记的膜联蛋白Ⅴ（AnnexinⅤ-FITC）/碘化丙啶（PI）染色结合流式细胞术检测各组SH-SY5Y细胞凋亡率，Western blotting法检测3种细胞中含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)相关蛋白表达水平以及SH-SY5Y细胞中B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）和磷酸化的p38 MAPK(p-p38 MAPK)蛋白以及LPA1受体蛋白表达水平。结果：与100μmol·L~(-1) 6-OHDA组比较，4μmol·L~(-1) LPA+100μmol·L~(-1)6-OHDA组和10μmol·L~(-1) LPA+100μmol·L~(-1) 6-OHDA组SH-SY5Y细胞数和细胞活性均明显降低（P<0.05或P<0.01），细胞凋亡率升高（P<0.05或P<0.01）。与100μmol·L~(-1) 6-OHDA组比较，4μmol·L~(-1) LPA+100μmol·L~(-1) 6-OHDA组和10μmol·L~(-1) LPA+100μmol·L~(-1) 6-OHDA组3种细胞中Caspase-3蛋白表达水平无明显变化，差异无统计学意义（P>0.05）;4μmol·L~(-1) LPA+100μmol·L~(-1)6-OHDA组SH-SY5Y细胞中裂解的Caspase-3(Cleaved Caspase-3)蛋白表达水平明显升高（P<0.01）;4μmol·L~(-1) LPA+100μmol·L~(-1) 6-OHDA组和10μmol·L~(-1) LPA+100μmol·L~(-1) 6-OHDA组PC12细胞中Cleaved Caspase-3蛋白表达水平明显升高（P<0.05或P<0.01）; 4μmol·L~(-1) LPA+100μmol·L~(-1) 6-OHDA组N2a细胞中Cleaved Caspase-3蛋白表达水平升高（P<0.05）。与100μmol·L~(-1)6-OHDA组比较，4μmol·L~(-1) LPA+100μmol·L~(-1) 6-OHDA和10μmol·L~(-1) LPA+100μmol·L~(-1)6-OHDA组SH-SY5Y细胞中Bax和Bcl-2蛋白表达水平无明显变化，差异无统计学意义（P>0.05）,Bax/Bcl-2比值升高（P<0.05）;10μmol·L~(-1) LPA+100μmol·L~(-1) 6-OHDA组SH-SY5Y细胞中p38MAPK蛋白表达水平升高（P<0.05）,4μmol·L~(-1) LPA+100μmol·L~(-1) 6-OHDA组SH-SY5Y细胞中p-p38 MAPK蛋白表达水平明显升高（P<0.01）, p-p38 MAPK/p38 MAPK比值升高（P<0.05）;10μmol·L~(-1) LPA+100μmol·L~(-1) 6-OHDA组SH-SY5Y细胞中LPA1受体蛋白表达水平降低（P<0.05）。结论：LPA与6-OHDA联合应用能明显诱导SH-SY5Y细胞凋亡，其作用机制可能与上调细胞中p38 MAPK和p-p38 MAPK蛋白表达水平有关。
关键词：溶血磷脂酸;;6-羟基多巴胺;;SH-SY5Y细胞;;细胞凋亡;;p38丝裂原活化蛋白激酶
基金资助：山东省卫健委医药卫生科技发展计划项目（2018WS063）;; 山东省教育厅基金项目（J14LK15）;山东省教育厅国家级大学生创新创业训练计划项目（202010438026）;; 山东第二医科大学博士科研启动基金科研创新计划项目（2024BKQ048）
