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作者：陈思童;杨丹;李庆杰;唐晓雷;王汉;刘扬扬;刘铁军;
单位：长春中医药大学中医学院中医学系;长春中医药大学附属医院肝脾胃病科;长春中医药大学附属医院中医药研究中心;长春中医药大学附属医院治未病科;
摘要：目的：探讨葛根素（Pue）对高脂饮食诱导小鼠非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）的改善作用，并阐明其可能的作用机制。方法：将36只C57BL/6J小鼠随机分为对照组、模型组、低剂量Pue组（20.0 mg·kg~(-1)）、中剂量Pue组（40.0 mg·kg~(-1)）、高剂量Pue组（80.0 mg·kg~(-1)）和阳性药组[阿托伐他汀钙（AT）组]（10.0 mg·kg~(-1) AT），每组6只。除对照组小鼠给予正常饮食外，其余各组小鼠均给予高脂饮食喂养以建立NAFLD模型。测量各组小鼠体质量，并计算肝指数；采用HE染色观察各组小鼠肝组织病理形态表现；采用生化试剂盒测定各组小鼠血清和肝组织中总胆固醇（TC）及甘油三酯（TG）水平，血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天门冬氨酸氨基转移酶（AST）水平，肝组织中丙二醛（MDA）水平以及超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性，并检测肝组织中炎症因子[白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)]水平。基于网络药理学框架，通过整合PubChem和SwissTargetPrediction等数据库预测Pue的潜在治疗靶点，结合GeneCards等平台获取的NAFLD相关疾病靶点构建蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络，并进行基因本体论（GO）功能和京都基因与基因组百科全书（KEGG）信号通路富集分析。采用Western blotting法检测各组小鼠肝组织中Kelch样ECH关联蛋白1(Keap1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)和醌氧化还原酶1(NQO1)蛋白表达水平。另取30只小鼠分为对照组、模型组、 Pue组（80.0 mg·kg~(-1) Pue灌胃）、模型+Nrf2抑制剂ML385组（30.0 mg·kg~(-1)ML385腹腔注射）和Pue+Nrf2抑制剂ML385组（80.0 mg·kg~(-1) Pue灌胃+30 mg·kg~(-1) ML385腹腔注射），每组6只。再次检测上述氧化应激和炎症指标以及相关蛋白表达情况。结果：与对照组比较，模型组小鼠体质量和肝指数明显升高（P<0.01）；与模型组比较，低、中和高剂量Pue组及AT组小鼠体质量以及肝指数明显降低（P<0.05或P<0.01）。HE染色，与对照组比较，模型组小鼠肝组织出现明显的脂质积累和病理损伤；与模型组比较，低、中和高剂量Pue组及AT组小鼠肝组织的脂滴积累情况以及病理损伤均有不同程度的改善。与对照组比较，模型组小鼠肝组织中TC、TG、IL-6、IL-1β、TNF-α和MDA水平以及血清中TC、TG、ALT和AST水平明显升高（P<0.01），肝组织中SOD和GSH-Px活性明显降低（P<0.01）；与模型组比较，低、中和高剂量Pue组及AT组小鼠肝组织中TC、TG、IL-6、IL-1β、TNF-α和MDA水平以及血清中TC、TG、ALT和AST水平明显降低（P<0.05或P<0.01），肝组织中SOD和GSH-Px活性明显升高（P<0.05或P<0.01）。网络药理学分析筛选获得Pue治疗NAFLD的核心靶点包括Nrf2、TNF和IL-6等，预测Pue可能通过调控氧化应激、炎症和凋亡等途径发挥作用。Western blotting法，与对照组比较，模型组小鼠肝组织中Keap1蛋白表达水平升高（P<0.01）,Nrf2、HO-1和NQO1蛋白表达水平均降低（P<0.01）；与模型组比较，低、中和高剂量Pue组及AT组小鼠肝组织中Keap1蛋白表达水平降低（P<0.05或P<0.01）,Nrf2、HO-1和NQO1蛋白表达水平均升高（P<0.05或P<0.01）。Nrf2抑制剂ML385干预后，与Pue组比较，Pue+ML385组小鼠肝组织中IL-6、IL-1β、TNF-α和MDA水平均明显升高（P<0.05）,SOD和GSH-Px活性均明显降低（P<0.05或P<0.01），肝组织中Keap1蛋白表达水平升高（P<0.01）,Nrf2、HO-1和NQO1蛋白表达水平均明显降低（P<0.01）。结论：Pue能够改善NAFLD小鼠的脂质代谢和肝功能，减轻肝脏损伤，提高肝组织抗氧化能力，并减少炎症因子释放，其机制可能与激活Keap1/Nrf2/HO-1信号通路有关。
关键词：葛根素;;非酒精性脂肪性肝病;;氧化应激;;炎症;;核因子E2相关因子2
基金资助：科技部国家重点研发计划项目（2018YFC1704100）;; 吉林省科技厅科技发展计划项目（20210101199JC,YDZJ202301ZYTS475,YDZJ202301ZYTS460）;; 吉林省卫健委卫生健康科技能力提升项目（2022jc049）;; 吉林省教育厅科学技术研究项目（JJKH20230991KJ）
