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作者：王镜媛;陈芳;刘艳存;李士欣;寿松涛;
单位：天津医科大学总医院急诊医学科;
摘要：目的：探讨上游转录因子2 (USF2)对脓毒症大鼠凝血功能障碍的影响，并基于蛋白质酪氨酸磷酸酶非受体型2 (PTPN2)/c-Jun氨基末端激酶（JNK）/甾醇调节元件结合蛋白2 (SREBP2)信号通路分析其潜在的作用机制。方法：从265只健康SD大鼠中随机选取15只作为对照组（不结扎不穿刺），剩余250只大鼠采用盲肠结扎穿刺（CLP）法构建脓毒症模型。将造模成功的75只大鼠随机分为模型组（CLP）、阳性药物组（CLP+20 mg·kg-1辛伐他汀）、小干扰RNA (si RNA)阴性对照（si-NC）组（CLP+转染si-NC）、 si-USF2组（CLP+转染USF2-si RNA）和JNK激活剂组（CLP+转染USF2-si RNA+2 mg·kg-1 JNK激活剂Anisomycin），每组15只。采用自动血细胞计数器分析仪评估各组大鼠血小板（PLT）计数；自动凝血分析仪测定各组大鼠凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）和凝血酶时间（TT）以及D-二聚体（DD）和纤维蛋白原（FIB）水平；酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测各组大鼠血清中白细胞介素1β (IL-1β)、白细胞介素6 (IL-6)、肿瘤坏死因子α (TNF-α)、C反应蛋白（CRP）和降钙素原（PCT）等炎性因子水平；采用试剂盒检测各组大鼠血清中超氧化物歧化酶（SOD）活性以及丙二醛（MDA）和谷胱甘肽（GSH）水平；HE染色观察各组大鼠肺组织和盲肠组织病理形态表现；实时荧光定量PCR (RT-q PCR)和Western blotting法检测各组大鼠肺组织和盲肠组织中USF2 m RNA和蛋白表达水平以及PTPN2、磷酸化JNK(p-JNK)、JNK和SREBP2蛋白表达水平。结果：造模12 d后，对照组大鼠生存率明显高于模型组。与对照组比较，模型组、阳性药物组、si-NC组、si-USF2组和JNK激活剂组大鼠肺组织及盲肠组织中USF2 m RNA和蛋白表达水平明显升高（P<0.05）；与模型组和si-NC组比较，si-USF2组和JNK激活剂组大鼠肺组织及盲肠组织中USF2 m RNA和蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。与对照组比较，模型组、阳性药物组、 si-NC组、 si-USF2组和JNK激活剂组大鼠PLT计数明显降低（P<0.05）；与模型组比较，阳性药物组、si-USF2组和JNK激活剂组大鼠PLT计数明显升高（P<0.05）；与si-NC组比较，si-USF2组和JNK激活剂组大鼠PLT计数明显升高（P<0.05）；与si-USF2组比较，JNK激活剂组大鼠PLT计数明显降低（P<0.05）。与对照组比较，模型组、阳性药物组、si-NC组、si-USF2组和JNK激活剂组大鼠APTT、PT和TT及DD水平明显升高（P<0.05）,FIB水平明显降低（P<0.05）；与模型组比较，阳性药物组、si-USF2组和JNK激活剂组大鼠APTT、PT和TT及DD水平明显降低（P<0.05）,FIB水平明显升高（P<0.05）；与si-NC组比较，si-USF2组和JNK激活剂组大鼠APTT、PT和TT及DD水平明显降低（P<0.05）,FIB水平明显升高（P<0.05）；与siUSF2组比较，JNK激活剂组大鼠APTT、PT和TT及DD水平明显升高（P<0.05）,FIB水平明显降低（P<0.05）。与对照组比较，模型组、阳性药物组、si-NC组、si-USF2组和JNK激活剂组大鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α、CRP、PCT和MDA水平均明显升高（P<0.05）,SOD活性和GSH水平明显降低（P<0.05）；与模型组比较，阳性药物组、si-USF2组和JNK激活剂组大鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α、CRP、PCT和MDA水平明显降低（P<0.05）,SOD活性和GSH水平明显升高（P<0.05）；与si-NC组比较，si-USF2组和JNK激活剂组大鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α、CRP、PCT及MDA水平明显降低（P<0.05）,SOD活性和GSH水平明显升高（P<0.05）；与si-USF2组比较，JNK激活剂组大鼠血清中IL-1β、 IL-6、 TNF-α、 CRP、 PCT和MDA水平明显升高（P<0.05）,SOD活性和GSH水平明显降低（P<0.05）。与对照组比较，模型组大鼠肺组织肺泡结构被破坏，盲肠组织绒毛消失，大量炎性细胞浸润；与模型组比较，阳性药物组、si-USF2组和JNK激活剂组大鼠肺组织肺泡破坏程度及盲肠组织绒毛损坏程度减轻，炎性细胞浸润减少；与si-NC组比较，si-USF2组和JNK激活剂组大鼠肺组织和盲肠组织上述病理变化程度明显减轻；与si-USF2组比较，JNK激活剂组大鼠肺组织和盲肠组织上述病理变化加重。与对照组比较，模型组、阳性药物组、si-NC组、si-USF2组和JNK激活剂组大鼠肺组织和盲肠组织中SREBP2蛋白表达水平及p-JNK/JNK比值明显升高（P<0.05）,PTPN2蛋白表达水平明显降低（P<0.05）；与模型组比较，阳性药物组、si-USF2组和JNK激活剂组大鼠肺组织和盲肠组织中SREBP2蛋白表达水平及p-JNK/JNK比值明显降低（P<0.05）,PTPN2蛋白表达水平明显升高（P<0.05）；与si-NC组比较，si-USF2组和JNK激活剂组大鼠肺组织及盲肠组织中SREBP2蛋白表达水平和p-JNK/JNK比值明显降低（P<0.05）,PTPN2蛋白表达水平明显升高（P<0.05）；与si-USF2组比较，JNK激活剂组大鼠肺组织和盲肠组织中SREBP2蛋白表达水平及p-JNK/JNK比值明显升高（P<0.05）,PTPN2蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。结论：敲低USF2基因能够明显改善脓毒症大鼠的肺部和盲肠组织病理形态，缓解凝血功能障碍，并降低机体炎性因子和氧化应激水平，其作用机制可能与其调控PTPN2/JNK/SREBP2信号通路有关。
关键词：上游转录因子2;;脓毒症;;凝血功能障碍;;蛋白质酪氨酸磷酸酶非受体型2;;c-Jun氨基末端激酶;;甾醇调节元件结合蛋白-2
基金资助：天津市卫健委卫生健康科技项目（TJWJ2021MS887）
