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作者:丁云杉;代海涛;陈敏;郝小慧;周肖;仵楠;
单位:石河子大学第一附属医院口腔科;
摘要:目的:探讨瞬时受体电位香草酸通道2(TRPV2)对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响以及大麻二酚(CBD)通过TRPV2通道对OSCC细胞生物学行为的影响,并阐明其相关抗肿瘤机制。方法:利用脂质体法将小干扰RNA(siRNA)片段转染至CAL-27细胞,分为si-NC组(转染无相关性的si-NC)和si-TRPV2组(转染沉默TRPV2基因的特异性siRNA);不同剂量CBD培养CAL-27细胞,分为0、10、20和40μmol·L~(-1) CBD组,采用实时荧光定量PCR(RTqPCR)法和Western blotting法检测各组细胞中TRPV2 mRNA和蛋白表达水平,采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法、细胞划痕愈合实验和Transwell小室实验分别检测各组CAL-27细胞增殖活性、细胞划痕愈合率和侵袭细胞数。结果:RT-qPCR法和Western blotting法,si-NC组CAL-27细胞中TRPV2 mRNA和蛋白表达水平均高于si-TRPV2组(P<0.01)。CCK-8法,与si-NC组比较,siTRPV2组转染后48和72 h细胞增殖活性均明显降低(P<0.01)。细胞划痕愈合实验,与si-NC组比较,si-TRPV2组24 h CAL-27细胞划痕愈合率明显降低(P<0.01)。Transwell小室实验,与si-NC组比较,si-TRPV2组侵袭细胞数减少(P<0.01);RT-qPCR法和Western blotting法,与0μmol·L~(-1) CBD组比较,10、20和40μmol·L~(-1) CBD组CAL-27细胞中TRPV2 mRNA及蛋白表达水平均降低(P<0.05或P<0.01);CCK-8法,与0μmol·L~(-1) CBD组比较,20和40μmol·L~(-1) CBD组药物培养后48、72和96 h细胞存活率均明显降低(P<0.01);细胞划痕愈合实验,CBD培养12和24 h,与0μmol·L~(-1) CBD组比较,10、20和40μmol·L~(-1) CBD组CAL-27细胞划痕愈合率均明显降低(P<0.01);Transwell小室实验,与0μmol·L~(-1) CBD组比较,40μmol·L~(-1) CBD组侵袭细胞数减少(P<0.01)。结论:沉默TRPV2基因和CBD处理均能抑制CAL-27细胞增殖、迁移和侵袭能力,CBD能降低CAL-27细胞中TRPV2基因和蛋白表达。
关键词:瞬时受体电位香草酸通道2;;口腔鳞状细胞癌;;大麻二酚;;细胞迁移;;细胞侵袭
基金资助:新疆生产建设兵团指导性科技计划项目(2024ZD067);; 石河子大学第一附属医院科技计划项目(ZP2024005)