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作者：马宁;柳爽;王成瑶;卢嘉骏;陈琳渝;王梓祎;赵伟钦;王伟潼;车鹏程;孙红;
单位：华北理工大学基础医学院河北省慢性病重点实验室;华北理工大学护理与康复学院河北省康复工程与再生医学重点实验室;
摘要：目的:探讨负载外泌体(Exo)的可注射氧化右旋糖酐(ODex)/羧甲基壳聚糖(CMCS)(DCC)水凝胶(DCC/Exo)对小鼠术后腹腔粘连(PA)的改善效果,并阐明其机制。方法:提取大鼠Exo并制备DCC/Exo,检测其化学结构,采用免疫组织化学染色法检测注射DCC/Exo后小鼠背部皮肤组织中炎症因子Ly-6G的表达情况以评价其生物相容性。采用盲肠刮擦法建立小鼠术后PA模型。将KM小鼠随机分为对照组、透明质酸凝胶(HA)组、DCC组和DCC/Exo组。于术后5和14 d观察各组小鼠PA情况并进行评分,采用HE染色观察各组小鼠PA组织病理形态表现。于术后5d,采用免疫组织化学染色法检测各组小鼠PA组织中髓过氧化物酶(MPO)表达水平,二氢乙锭(DHE)荧光探针法检测各组小鼠PA组织中活性氧(ROS)水平,免疫荧光染色法检测各组小鼠PA组织中氧化损伤标志物8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)和间皮-间质转化(MMT)相关蛋白E-钙黏蛋白(Ecadherin)及波形蛋白(Vimentin)表达水平,Mitotracker荧光探针法检测各组小鼠PA组织中线粒体损伤程度,末端脱氧核苷酸转移酶dUTP缺口末端标记(TUNEL)染色法检测各组小鼠PA组织中细胞凋亡率。结果:提取分离的Exo具有杯形双膜结构;DCC水凝胶负载Exo后,其特征吸收峰未发生明显位移。免疫组织化学染色法,小鼠背部皮肤组织中仅存在少量的中性粒细胞浸润。术后5和14d,与对照组和DCC组比较,DCC/Exo组小鼠平均粘连评分明显降低(P<0.001)。HE染色,对照组小鼠PA严重且出现大量炎性细胞浸润,HA组和DCC组小鼠PA减轻,DCC/Exo组小鼠腹腔未见粘连,仅见少量炎症细胞。免疫组织化学染色,术后5d,对照组小鼠PA组织表现出明显弥漫炎性浸润;与对照组和DCC组比较,DCC/Exo组小鼠PA组织中MPO表达水平明显降低(P<0.001)。DHE染色,与对照组和DCC组比较,DCC/Exo组小鼠PA组织中ROS水平明显降低(P<0.001)。免疫荧光染色,与对照组和DCC组比较,DCC/Exo组小鼠PA组织中8-OHdG和Vimentin表达水平明显降低(P<0.001),E-cadherin表达水平明显升高(P<0.001)。与对照组和DCC组比较,DCC/Exo组小鼠PA组织中Mitotracker荧光信号面积比例明显升高(P<0.001),线粒体损伤程度降低。与对照组和DCC组比较,DCC/Exo组小鼠PA组织中细胞凋亡率明显降低(P<0.001)。结论:局部应用DCC/Exo复合水凝胶可有效减轻小鼠术后PA程度,其作用机制可能与抑制局部炎症浸润、降低组织氧化应激水平、减少细胞凋亡以及抑制MMT进程有关。
关键词：术后腹腔粘连;;水凝胶;;外泌体;;氧化应激;;间皮-间质转化
基金资助：河北省科技厅自然科学基金项目(H2023209021,H2024209013);; 河北省教育厅大学生创新创业训练计划项目(202410081057)
