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作者：邓玲;李首庆;钮春雪;林秀英;米旭光;付建华;
单位：长春中医药大学临床医学院;吉林省人民医院生殖医学中心;
摘要：目的:探讨双酚AF (BPAF)对子宫内膜基质细胞(hESCs)衰老的影响,并阐明雷帕霉素(Rapa)对BPAF诱导的hESCs衰老的抑制作用。方法:体外培养hESCs,采用0、7.5、15.0、30.0、60.0和120.0μmol·L~(-1) BPAF处理hESCs。采用MTT法检测不同浓度BPAF作用后hESCs存活率。将hESCs分为对照组(正常培养基)、BPAF组(加入含30.0μmol·L~(-1) BPAF培养基)和Rapa组(加入含30.0μmol·L~(-1) BPAF及100.0 nmol·L~(-1) Rapa培养基)。采用衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色法检测各组细胞中SA-β-gal阳性细胞百分率,流式细胞术检测各组细胞周期百分率,实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组细胞中p16、p21和p53 mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中衰老相关蛋白p16、p21和p53及自噬相关蛋白p62、微管相关蛋白1轻链3型蛋白Ⅱ(LC3-Ⅱ)和微管相关蛋白1轻链3型蛋白Ⅰ(LC3-Ⅰ)表达水平。结果:MTT法,当BPAF浓度为30.0μmol·L~(-1)时,细胞存活率达75%,后续实验选用30.0 0μmol·L~(-1) BPAF诱导细胞衰老。与对照组比较,BPAF组SA-β-gal阳性细胞百分率明显升高(P<0.01),G_1期细胞百分率明显升高(P<0.01),细胞中p16、p21和p53 mRNA及蛋白表达水平均明显升高(P<0.01)。与BPAF组比较,Rapa组SA-β-gal阳性细胞百分率明显降低(P<0.01),G_1期细胞百分率明显降低(P<0.01),细胞中p16、p21和p53 mRNA及蛋白表达水平均明显降低(P<0.01),自噬相关p62蛋白表达水平明显降低(P<0.01),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值明显升高(P<0.01)。结论:高浓度BPAF可抑制hESCs增殖并诱导细胞衰老,Rapa可抑制BPAF诱导的细胞衰老,其作用机制可能与细胞自噬激活有关。
关键词：子宫内膜基质细胞;;双酚AF;;细胞衰老;;雷帕霉素;;自噬;;衰老相关β-半乳糖苷酶
基金资助：吉林省科技厅科技发展计划项目(20250601012RC)
