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作者：朱林娇;陈志伟;胡俊杰;张鹏;石召华;
单位：湖北中医药大学药学院;湖北时珍实验室;湖北省中医院;湖北中医药大学中药资源与中药复方教育部重点实验室;
摘要：目的 优化金莲花总黄酮提取纯化工艺，并评价其抗光老化作用。方法 在单因素试验基础上，以乙醇体积分数、料液比、提取时间、提取温度为影响因素，总黄酮得率为评价指标，Box-Behnken响应面法优化提取工艺。以上样质量浓度、径高比、上样体积流量、洗脱液(乙醇)体积分数、洗脱体积流量、洗脱体积为影响因素，总黄酮纯度为评价指标，单因素试验优化纯化工艺。再测定DPPH·、ABTS~+·、OH·、O_2~-·自由基清除率及弹性蛋白酶抑制率，建立中波紫外线(UVB)诱导人原代真皮成纤维细胞(HDF)光老化模型，检测细胞存活率，ROS、MDA、IL-6、MMP-1、COL-1水平及SOD活性。结果 最佳提取工艺为乙醇体积分数70%,料液比1∶9,提取时间110 min,提取温度75℃,总黄酮得率为12.47%。最佳纯化工艺为上样质量浓度0.3 mg/mL,径高比1∶9,上样体积流量1.5 BV/h,乙醇体积分数30%,洗脱体积流量3 BV/h,洗脱体积4 BV,总黄酮纯度为89.33%。总黄酮对4种自由基的IC_(50)值分别为13.52μg/mL、5.608μg/mL、5.103 mg/mL、28.11 mg/mL,清除率呈剂量依赖性。弹性蛋白酶抑制率呈剂量依赖性，总黄酮质量浓度为2 mg/mL时达49.78%。与模型组比较，25、50、100μg/mL总黄酮组细胞存活率、SOD活性升高(P<0.01),MMP-1水平降低(P<0.01),ROS产生被抑制；50、100μg/mL总黄酮组MDA、IL-6水平降低(P<0.05,P<0.01),COL-1水平升高(P<0.05,P<0.01)。结论 该方法稳定可靠，可用于提取纯化抗光老化作用较强的金莲花总黄酮。
关键词：金莲花;;总黄酮;;提取纯化工艺;;抗光老化作用;;中波紫外线(UVB);;人原代真皮成纤维细胞(HDF);;Box-Behnken响应面法;;单因素试验
基金资助：湖北省自然科学基金委员会重点项目(2023AFD127);; 湖北省教育厅计划项目(T2023014)
