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作者：王凤娇;顾超;胡沙;冯琴;郑儒娟;朱增燕;王文娟;
单位：苏州大学附属儿童医院药剂科;
摘要：目的：探讨低剂量甲氨蝶呤（MTX）联合索拉非尼（SFN）对人骨肉瘤（OS）的抗肿瘤作用，并阐明其可能的作用机制。方法：体外培养4种人OS细胞（143B细胞、HOS细胞、U2OS细胞和MG63细胞），采用Western blotting法测定各种细胞中的血管内皮生长因子（VEGF）和血管内皮细胞生长因子受体2 (VEGFR2)蛋白表达水平；建立人OS裸鼠皮下移植瘤模型，并将建模成功的20只BABL/C裸鼠随机分为对照组（给予2%二甲基亚砜+98%玉米油）、低剂量MTX组（给予2 mg·kg~(-1) MTX）、SFN组（给予15 mg·kg~(-1) SFN）和联合用药组（给予2 mg·kg~(-1) MTX+15 mg·kg~(-1)SFN），每组5只，测量各组小鼠肿瘤体积并绘制肿瘤生长曲线；HE染色观察4组小鼠肿瘤组织病理形态表现，免疫组织化学法检测各组小鼠肿瘤组织中VEGFR2、细胞增殖抗原Ki-67和缺氧诱导因子1(HIF-1)蛋白阳性表达率；人OS 143B细胞分别给予0、 0.125、 0.250、 0.500、 1.000、 2.000和4.000μmol·L~(-1) MTX处理，CCK-8法检测各组143B细胞存活率，计算半数抑制浓度（IC50），并选取对143B细胞存活无影响的MTX浓度作为低剂量MTX；人OS 143B细胞分为对照组和低剂量MTX组（给予0和0.250μmol·L~(-1) MTX处理），酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测各组143B细胞中VEGF水平。结果：与143B细胞比较，HOS细胞、U2OS细胞和MG63细胞中VEGF及VEGFR2蛋白表达水平明显降低（P<0.001）。裸鼠皮下移植瘤模型中，与对照组比较，SFN组和联合用药组小鼠皮下移植瘤体积减少（P<0.001），与低剂量MTX组和SFN组比较，联合用药组小鼠皮下移植瘤体积减少（P<0.01）。免疫组织化学法，与对照组比较，联合用药组小鼠肿瘤组织中Ki-67、VEGFR2和HIF-1蛋白阳性表达率明显降低（P<0.05）。CCK-8法，0.250μmol·L~(-1) MTX对143B细胞增殖无明显改变。ELISA法，与对照组比较，低剂量MTX组143B细胞中VEGF水平明显降低（P<0.05）。结结论论：低剂量MTX促进了SFN对人OS的抗肿瘤作用，其可能是通过抑制OS细胞分泌VEGF进而增强SFN对人OS的抗肿瘤作用。
关键词：骨肉瘤;;索拉非尼;;甲氨蝶呤;;抗肿瘤;;血管内皮生长因子
基金资助：国家自然科学基金青年基金项目（32200775）;; 江苏省教育厅高等学校基础科学（自然科学）面上项目（21KJB320017）;; 苏州市科技局科教强卫项目（KJXW2020026）
