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作者：张潮鹤;张昕玮;王相峰;
单位：吉林大学第二医院肿瘤血液科;吉林大学药学院;吉林大学第一医院乐群院区药学部;
摘要：目的：探讨片仔癀（PZH）对对乙酰氨基酚（APAP）引起的肝损伤的保护作用，并阐明其可能的作用机制。方法：将人正常肝细胞（L02细胞）分为对照组、APAP组（10 mmol·L~(-1) APAP）、APAP+PZH组（10 mmol·L~(-1)APAP和0.4 g·L~(-1) PZH）和PZH组（0.4 g·L~(-1) PZH）。采用噻唑蓝（MTT）法检测各组细胞存活率，倒置显微镜观察各组肝细胞形态表现，流式细胞术检测各组肝细胞凋亡率，生化试剂盒检测各组细胞上清液中超氧化物歧化酶（SOD）和乳酸脱氢酶（LDH）活性及脂质过氧化物（MDA）水平，荧光探针技术检测各组肝细胞中活性氧（ROS）水平和线粒体膜电位（MMP）,Western blotting法检测各组细胞中凋亡相关蛋白、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B(AKT)信号通路蛋白、核因子κB (NF-κB)信号通路蛋白和炎症因子的蛋白表达水平。结果：MTT法，与对照组比较，APAP组细胞存活率明显降低（P<0.05）；与APAP组比较，APAP+PZH组细胞存活率明显升高（P<0.05）。倒置显微镜观察，与对照组比较，APAP组细胞呈现数量减少且排列疏松的趋势；与APAP组比较，APAP+PZH组细胞数量及排列得到显著改善。流式细胞术检测，与对照组比较，APAP组细胞凋亡率明显升高（P<0.05）；与APAP组比较，APAP+PZH组细胞凋亡率明显降低（P<0.05）。试剂盒检测，与对照组比较，APAP组细胞中LDH活性和MDA水平明显升高（P<0.05）,SOD活性明显降低（P<0.05）；与APAP组比较，APAP+PZH组细胞中LDH活性和MDA水平明显降低（P<0.05）,SOD活性明显升高（P<0.05）。与对照组比较，APAP组肝细胞中ROS荧光强度明显升高；与APAP组比较，APAP+PZH组肝细胞中ROS荧光强度明显降低。与对照组比较，APAP组肝细胞中MMP明显降低；与APAP组比较，APAP+PZH组肝细胞中MMP明显升高。Western blotting法，与对照组比较，APAP组细胞中含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶（caspase）-9、B细胞淋巴瘤2 (Bcl-2)相关X蛋白（BAX）、磷酸化PI3K (p-PI3K)、磷酸化AKT (p-AKT)、磷酸化NF-κB抑制蛋白α (p-IKBα)、p-P65、磷酸化kappa B抑制因子激酶β (p-IKKβ)、白细胞介素1β (IL-1β)、白细胞介素6 (IL-6)和肿瘤坏死因子α (TNF-α)蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,Bcl-2蛋白表达水平明显降低（P<0.05）；与APAP组比较，APAP+PZH组细胞中caspase-9、BAX、p-PI3K、p-AKT、p-IKBα、p-P65、p-IKKβ、IL-1β、IL-6和TNF-α蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,Bcl-2蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。结论：PZH能够降低APAP引起的细胞内氧化应激和炎症反应，缓解L02细胞损伤，其作用机制可能与调控PI3K/AKT和NF-κB信号通路有关。
关键词：片仔癀;;药物性肝损伤;;氧化应激;;磷脂酰肌醇3-激酶;;蛋白激酶B;;核因子κB
基金资助：吉林省卫生健康科技能力提升项目（3D5223722429）
