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作者：张硕;夏云秀;陈微微;董洪亮;崔冰洁;刘翠兰;刘志强;王飞;杜静;
单位：滨州医学院附属医院妇产科;滨州医学院附属医院医学研究中心;山东大学医学融合与实践中心;
摘要：目的：探讨核受体亚家族2F组成员2 (NR2F2)对人卵巢癌SKOV3细胞生物学行为的影响，并阐明其分子机制，为卵巢癌的临床治疗提供新的思路。方法：采用基因表达谱交互式分析（GEPIA）数据库分析卵巢组织中NR2F2基因表达水平，并分析其与卵巢癌患者临床预后的相关性。将人卵巢癌SKOV3细胞分为对照组和NR2F2过表达组（NR2F2 OE组），待细胞密度达到70%时，分别转染mCherry对照病毒和NR2F2 OE过表达病毒，48 h后通过嘌呤霉素（puro）筛选稳定转染的SKOV3细胞系。采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法和Western blotting法检测2组细胞转染效率，RT-qPCR法检测2组细胞中NR2F2和性别决定区Y-box 2 (SOX2) mRNA表达水平，Western blotting法检测2组细胞中NR2F2、SOX2、三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2 (ABCG2)和程序性细胞死亡配体1(PD-L1)蛋白表达水平。CCK-8法检测2组细胞增殖活性，细胞划痕实验检测2组细胞迁移率，Transwell小室实验检测2组穿膜细胞数，成球实验检测2组细胞成球数，外周血单核细胞（PBMCs）杀伤肿瘤细胞活性实验检测2组存活肿瘤细胞的相对密度，CCK-8法检测紫杉醇（PTX）和卡铂（CBP）对2组细胞的半数抑制浓度（IC50）。结果：与正常卵巢组织比较，卵巢肿瘤组织中NR2F2 mRNA表达水平降低（P<0.05），并随卵巢肿瘤临床病理分级提高而降低；NR2F2 mRNA表达水平较高的患者临床预后较好。成功构建过表达NR2F2的SKOV3细胞，与对照组比较，NR2F2 OE组细胞中NR2F2 mRNA和蛋白表达水平均明显升高（P<0.001）;CCK-8实验，与对照组比较，不同时间点（1、2、3和4 d） NR2F2 OE组细胞增殖活性均降低（P<0.05或P<0.01）；细胞划痕实验，与对照组比较，NR2F2 OE组细胞迁移率降低（P<0.001）;Transwell小室实验，与对照组比较，NR2F2 OE组穿膜细胞数减少（P<0.01）；与对照组比较，NR2F2 OE组细胞成球数减少（P<0.05）,SKOV3细胞中SOX2 mRNA (P<0.01)和蛋白（P<0.001）表达水平均降低；与对照组比较，NR2F2 OE组存活肿瘤细胞的相对密度降低，但差异无统计学意义（P>0.05）,PD-L1蛋白表达水平降低（P<0.05）；与对照组比较，NR2F2 OE组细胞增殖活性减弱（P<0.05），对PTX和CBP的药物敏感性增强，PTX的IC50明显减小，CBP的IC50因其药物浓度过高未能计算；ABCG2蛋白表达水平降低（P<0.05）。结论：NR2F2过表达可抑制人卵巢癌SKOV3细胞的增殖、迁移和侵袭能力，降低SOX2、PD-L1和ABCG2蛋白表达水平，抑制人卵巢癌SKOV3细胞的干性和免疫逃逸能力，增强人卵巢癌SKOV3细胞对PTX和CBP的敏感性。
关键词：核受体亚家族2F组成员2;;卵巢肿瘤;;肿瘤干性;;免疫逃逸;;耐药
基金资助：国家自然科学基金项目（31900441,82373097）;; 中国博士后自然科学基金项目（2023M742089）;; 山东省科技厅自然科学基金项目（ZR2019MC026,ZR2023QH080,ZR2022MH305,ZR2022QH192）;山东省科技厅泰山学者青年基金项目（2021）;; 山东省卫健委齐鲁卫生与健康杰出青年人才项目（2020）
