来源：期刊VIP网 时间：
作者：张丽娜;巴隆;孟峻;
单位：内蒙古医科大学附属医院临床检验诊断教研室;内蒙古医科大学附属医院检验科;
摘要：目的：构建含有小鼠血清和糖皮质激素诱导激酶（SGK） 1基因的真核表达载体pcDNA3.1-MYC-SGK1-mcherry，并观察载体在转染HEK293细胞后的表达情况。方法：PCR法扩增SGK1目的基因片段，并与经过HindⅢ和SbfⅠ双酶切的pcDNA3.1-MYC-C-mcherry载体连接。酶切和测序验证成功后，采用脂质体转染法将pcDNA3.1-MYC-SGK1-mcherry转染至HEK293细胞中，Western blotting法测定HEK293细胞中真核表达载体的表达情况。结果：酶切载体条带位于5 200 bp，目的基因条带位于3 100 bp，与预期结果相符。Snap Gene软件比对，pcDNA3.1-MYC-SGK1-mcherry的测序结果与预期序列一致，表明真核表达载体pcDNA3.1-MYC-SGK1-mcherry构建成功。Western blotting法观察到转染后的HEK293细胞在相对分子质量49 000附近显现出明显的条带，真核表达载体pcDNA3.1-MYC-SGK1-mcherry成功表达。结论：成功构建真核表达载体pcDNA3.1-MYC-SGK1-mcherry，为后续研究SGK1基因对小鼠受精卵细胞早期发育的作用机制奠定了基础。
关键词：血清和糖皮质激素诱导激酶1;;真核表达载体;;HEK293细胞;;载体构建;;质粒
基金资助：国家自然科学基金项目（81360109,81660267）;; 内蒙古自治区科技厅自然科学基金项目（2021MS08158）
