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作者：胡明阳;李毓雯;赵璐;方禹鑫;董娜;
单位：东北农业大学动物科学技术学院;
摘要：为研究抗菌肽Stomoxyn在乳酸乳球菌中的高效表达，试验将氯离子诱导型启动子（Chloride-Inducible Promoter,CIP）和经乳酸乳球菌密码子偏好性优化后的抗菌肽Stomoxyn基因分别克隆至载体pUC57中，并通过不同的双酶切组合获得启动子和抗菌肽基因。随后，利用T4连接酶分别将启动子和抗菌肽基因先后插入pNZ8048质粒中，挑选阳性克隆进行验证，并使用电转法构建重组乳酸乳球菌。氯化钠诱导表达后，对菌体蛋白进行了Tricine-SDS-PAGE分析和Western blot分析。最后通过最小抑菌浓度检测重组肽的抑菌效果。结果表明：成功构建空载乳酸乳球菌NZ9000/pNZ8048-CIP和重组乳酸乳球菌NZ9000/pNZ8048-CIP-Stomoxyn。在氯化钠诱导下，乳酸乳球菌NZ9000/pNZ8048-CIP-Stomoxyn胞内成功表达重组Stomoxyn(rStomoxyn)蛋白，分子质量约为5.3 ku。在0.4 mol/L NaCl诱导6 h后，rStomoxyn达到最高水平24μg/L。rStomoxyn对革兰氏阴性菌具有更强的抑菌活性。本研究构建的氯离子诱导型重组乳酸菌成功表达抗菌肽rStomoxyn，为乳酸菌在动物肠道内持续表达抗菌肽提供了新思路。
关键词：氯离子启动子;;乳酸乳球菌;;抗菌肽;;重组质粒
基金资助：国家自然科学基金-区域创新发展联合基金重点项目（U21A20252）;; 黑龙江省自然科学基金杰出青年项目（JQ2022C002）
