来源：期刊VIP网 时间：
作者：朱平胜;葛思堂;左芦根;陈德利;张洋洋;
单位：蚌埠医科大学第一附属医院胃肠外科;
摘要：目的：探讨微小RNA-325-3p(miR-325-3p)过表达对结肠癌细胞侵袭和迁移的影响，阐明其作用机制。方法：收集25例明确诊断为结肠癌患者的肿瘤组织及对应的癌旁正常组织。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测癌旁正常组织和结肠癌组织中miR-325-3p和进化和淋巴兴趣相关结构域蛋白1(PRELID1) mRNA表达水平。采用RT-qPCR法和Western blotting法检测人正常结肠细胞NCM460及结肠癌细胞SW480、HCT116和HT-29中miR-325-3p及PRELID1 mRNA表达水平和PRELID1蛋白表达水平。将SW480细胞分为对照组、NC-mimics组、miR-325-3p mimics组、miR-325-3p mimics+oe-NC组和miR-325-3p mimics+oe-PRELID1组。采用Transwell小室实验和细胞划痕实验分别检测各组细胞侵袭及迁移能力，Western blotting法检测各组细胞中上皮-间质转化（EMT）中E-钙黏蛋白（E-Cadherin）、N-钙黏蛋白（N-Cadherin）和波形蛋白（Vimentin）表达水平。使用Targetscan生物信息学网站预测miR-325-3p下游靶基因，采用双荧光素酶实验验证miR-325-3p与PRELID1的靶向调控关系。结果：与癌旁正常组织比较，结肠癌组织中miR-325-3p表达水平明显降低（P<0.05）,PRELID1 mRNA表达水平明显升高（P<0.05），且结肠癌组织中miR-325-3p和PRELID1 mRNA表达水平呈负相关关系（r<0,R~2=0.392, P<0.001）。与NCM460细胞比较，SW480、 HCT116和HT-29细胞中miR-325-3p表达水平均明显降低（P<0.05）,PRELID1 mRNA表达水平明显升高（P<0.05）。与对照组和NC-mimics组比较，miR-325-3p mimics组SW480细胞侵袭细胞数明显减少（P<0.05），划痕愈合率降低（P<0.05）,E-Cadherin蛋白表达水平升高（P<0.05）,N-Cadherin和Vimentin蛋白表达水平降低（P<0.05）。双荧光素酶实验证实PRELID1是miR-325-3p的直接靶标。与miR-325-3p mimics+oe-NC组比较，miR-325-3p mimics+oe-PRELID1组SW480细胞侵袭细胞数明显增加（P<0.05），划痕愈合率升高（P<0.05）,E-Cadherin蛋白表达水平降低（P<0.05）,N-Cadherin和Vimentin蛋白表达水平均升高（P<0.05）。结论：过表达miR-325-3p可靶向下调PRELID1表达，抑制EMT进程，进而抑制SW480细胞侵袭和迁移。
关键词：微小RNA-325-3p;;进化和淋巴兴趣相关结构域蛋白1;;结肠肿瘤;;细胞侵袭;;细胞迁移;;上皮-间质转化
基金资助：安徽省卫健委卫生健康科研项目（AHWJ2022a019）;; 蚌埠医科大学自然科学研究项目（2023byzd095）
