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作者：郭玢欣;温娟;刘慧;王俊瑞;
单位：内蒙古医科大学第一临床医学院;内蒙古医科大学附属医院检验科;内蒙古自治区临床病原微生物重点实验室;
摘要：目的：制备纹带棒杆菌（C. striatum）生物膜形成相关蛋白菌毛组装蛋白D(SpaD)多克隆抗体，分析其抑制C. striatum强产膜株生物膜形成的作用和潜在应用价值。方法：选取2011-2021年内蒙古医科大学附属医院住院患者临床标本中分离的117株C. striatum为研究对象。采用结晶紫染色法检测各菌株生物膜形成能力，实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测SpaD编码基因spaD在C. striatum强产膜株中的分布。将C. striatum强产膜株分为对照组和蛋白酶K组，采用结晶染色法检测蛋白酶对C. striatum强产膜株生物膜形成能力的抑制作用。蛋白重组技术构建C. striatum SpaD重组蛋白，实验分为对照组和5及10 mg·L~(-1) SpaD重组蛋白组，采用结晶染色法检测SpaD重组蛋白对C. striatum强产膜株生物膜形成能力的抑制作用。并通过动物免疫获得兔抗SpaD多克隆抗体实验分为对照组和1∶400、1∶200及1∶100 SpaD多克隆抗体组，采用结晶紫染色法检测SpaD多克隆抗体对C. striatum强产膜临床株生物膜形成能力的抑制作用。结果：结晶紫染色法检测，强产膜株、中等产膜株和弱产膜株占比分别为47.9%(56/117)、29.0%(34/117)及23.1%(27/117)。RT-qPCR法，所有强产膜株均携带spaD基因。与对照组比较，5和10 mg·L~(-1) SpaD重组蛋白组13株强产膜菌生物膜形成能力均明显降低（P<0.05）。与对照组比较，1∶100和1∶200倍数稀释SpaD兔多克隆抗体组中分别有61.5%(8/13)及7.7%(1/13)的强产膜菌株生物膜形成能力明显降低（P<0.05）。结论：spaD基因在C.striatum强产膜株中呈高表达状态。SpaD多克隆抗体可明显抑制C. striatum强产膜株生物膜形成，其抑制效应呈浓度依赖性。SpaD可作为防治C. striatum产膜株感染的新靶点。
关键词：纹带棒杆菌;;生物膜;;纹带棒杆菌毒力;;菌毛组装蛋白D;;多克隆抗体
基金资助：国家自然科学基金项目(82260416);; 内蒙古自治区科技厅科技计划项目(2022YFSH0072)
