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作者：闫荣免;孙新婷;关欣;程谕;韩丽英;
单位：吉林大学第二医院妇产科;佳木斯大学附属第一医院妇产科;
摘要：目的：探讨激肽释放酶5(KLK5)过表达对宫颈癌细胞的增殖、侵袭及顺铂（DDP）敏感性的影响，并阐明其作用机制。方法：采用Western blotting法验证KLK5稳定转染过表达的宫颈癌细胞（ME180-OE-KLK5）。取对数生长期的宫颈癌ME180-NC-KLK5和OE-KLK5细胞，分别将其接种于裸鼠皮下建立皮下移植瘤模型，造模成功后裸鼠随机分为生理盐水对照组（NC-KLK5+0.9%NaCl组）、DDP治疗组（NC-KLK5+DDP组）、KLK5过表达组（OE-KLK5+0.9%NaCl组）和KLK5过表达联合DDP组（OE-KLK5+DDP组），每组5只。NC-KLK5+DDP组和OE-KLK5+DDP组裸鼠按照5 mg·kg~(-1)的比例腹腔注射DDP;NC-KLK5+0.9%NaCl组和OE-KLK5+0.9%NaCl组裸鼠按照0.01 mL·g~(-1)的比例腹腔注射生理盐水。每2 d称裸鼠质量，并记录瘤体的长径和短径，计算肿瘤体积，绘制瘤体生长曲线，于第14天给药结束后24 h，处死裸鼠，剥离瘤体并称质量。采用HE染色法观察各组裸鼠肿瘤组织病理形态表现，免疫组织化学染色法观察各组裸鼠肿瘤组织中KLK5、Ki67和基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达水平。结果：与ME180-NC-KLK5细胞比较，ME180-OE-KLK5细胞中KLK5蛋白表达水平升高（P<0.05）。皮下移植瘤种植后第1周，各组裸鼠进食和活动状态良好，体质量逐渐增长。第2周开始进入给药阶段，NC-KLK5+0.9%NaCl组裸鼠进食和活动状态及体质量较第1周无明显变化；与NC-KLK5+0.9%NaCl组比较，NC-KLK5+DDP组裸鼠开始出现食欲减退，体质量不增长，活动状态减弱；第3周药物治疗期间，NC-KLK5+0.9%NaCl组裸鼠进食及活动状态较第2周无明显变化，开始出现体质量不增长；与NC-KLK5+0.9%NaCl组比较，NC-KLK5+DDP组裸鼠进食和活动状态明显减弱，体质量降低。与NC-KLK5+0.9%NaCl组比较，NC-KLK5+DDP组裸鼠移植瘤体积减小（P<0.01）；与NC-KLK5+DDP组比较，OE-KLK5+DDP组裸鼠移植瘤体积明显增大（P<0.001）；与NC-KLK5+0.9%NaCl组比较，OE-KLK5+0.9%NaCl组裸鼠移植瘤体积增大（P<0.001）；与OE-KLK5+0.9%NaCl组比较，OE-KLK5+DDP组裸鼠移植瘤体积差异无统计学意义（P>0.05）。与NC-KLK5+0.9%NaCl组比较，NC-KLK5+DDP组裸鼠移植瘤质量降低（P<0.05）；与NC-KLK5+DDP组比较，OE-KLK5+DDP组裸鼠瘤质量明显升高（P<0.001）；与NC-KLK5+0.9%NaCl组比较，OE-KLK5+0.9%NaCl组裸鼠瘤质量升高（P<0.001）；与OE-KLK5+0.9%NaCl组比较，OE-KLK5+DDP组裸鼠瘤体质量差异无统计学意义（P>0.05）。与NC-KLK5+0.9%NaCl组比较，OE-KLK5+0.9%NaCl组裸鼠移植瘤细胞核异质性更强；OE-KLK5+DDP组和NC-KLK5+DDP组裸鼠移植瘤细胞出现形态学改变，表现为细胞核固缩、碎裂，肿瘤细胞体积缩小以及出现坏死和凋亡等。与NC-KLK5+DDP组比较，OE-KLK5+DDP组裸鼠移植瘤坏死程度更明显。与NC-KLK5+0.9%NaCl组比较，NC-KLK5+DDP组裸鼠移植瘤组织中KLK5、Ki67和MMP-9蛋白表达水平降低（P<0.05）；与NC-KLK5+DDP组比较，OE-KLK5+DDP组裸鼠移植瘤组织中KLK5、Ki67和MMP-9蛋白表达水平升高（P<0.001）；与NC-KLK5+0.9%NaCl组比较，OE-KLK5+0.9%NaCl组裸鼠移植瘤组织中KLK5、Ki67和MMP-9蛋白表达水平升高（P<0.001）；与OE-KLK5+0.9%NaCl组比较，OE-KLK5+DDP组裸鼠移植瘤组织中KLK5、Ki67和MMP-9蛋白表达水平差异无统计学意义（P>0.05）。结论：KLK5过表达可促进DDP处理的宫颈癌ME180细胞裸鼠皮下移植瘤的生长，上调移植瘤组织中Ki-67和MMP-9蛋白表达，降低移植瘤对DDP的敏感性。
关键词：激肽释放酶5;;宫颈肿瘤;;顺铂;;基质金属蛋白酶9;;ME180细胞;;移植瘤
基金资助：吉林省科技厅自然科学基金项目(YDZJ202301ZYTS054)
