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作者：曾超胜;陈琳;闫丽敏;邢槐杰;李莉;黄少珠;陈敏;常勇;匡冰;黎晓艳;
单位：海南医科大学第二附属医院神经内科;
摘要：目的：探讨血必净注射液对抗N-甲基-D-天冬氨酸受体（NMDAR）脑炎小鼠血脑屏障（BBB）损伤的作用，并阐明其对辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞（Treg）失衡的调控作用。方方法法：采用谷氨酸受体N1亚基（GluN1） 356-385抗原肽诱导建立主动免疫抗NMDAR脑炎小鼠模型，酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测小鼠血清中抗NMDAR免疫球蛋白G(IgG)抗体水平。选取健康未建模小鼠为对照组，建模成功小鼠随机分为模型组、低剂量血必净注射液（XBJ-L）组和高剂量血必净注射液（XBJ-H）组，每组10只，XBJ-L组和XBJ-H组小鼠于建模后分别腹腔注射5和10 mL·kg~(-1)血必净注射液。采用Longa评分法评估各组小鼠神经功能损伤情况，伊文思蓝（EB）染色检测各组小鼠BBB通透性，免疫荧光染色法检测各组小鼠大脑皮质中闭锁小带蛋白1(ZO-1)和闭合蛋白（Occludin）表达情况，Western blotting法检测各组小鼠大脑皮质中ZO-1、Occludin、紧密连接蛋白5(Claudin-5)和神经特异核蛋白（NeuN）蛋白表达水平，ELISA法检测各组小鼠血清中Th17和Treg相关细胞因子白细胞介素（IL）-17、IL-22和IL-10水平，流式细胞术检测各组小鼠外周血中Th17和Treg细胞百分率并计算Th17/Treg比值。结果：经GluN1 356-385抗原肽诱导的小鼠血清中NMDAR IgG抗体呈阳性，说明造模成功。与对照组比较，模型组小鼠神经功能损伤评分明显升高（P<0.05）；脑组织中EB水平明显升高（P<0.05），大脑皮质中ZO-1和Occludin荧光染色强度降低，大脑皮质中ZO-1、Occludin、Claudin-5和NeuN蛋白表达水平明显降低（P<0.05），血清中IL-17和IL-22水平明显升高（P<0.05）,IL-10水平明显降低（P<0.05），外周血中Th17细胞百分率明显升高（P<0.05）,Treg细胞百分率明显降低（P<0.05）,Th17/Treg比值明显增加（P<0.05）。与模型组比较，XBJ-L组和XBJ-H组小鼠神经功能损伤评分明显降低（P<0.05）；脑组织中EB水平明显降低（P<0.05）；大脑皮质中ZO-1和Occludin荧光染色强度升高，ZO-1、Occludin、Claudin-5和NeuN蛋白表达水平明显升高（P<0.05）；血清中IL-17和IL-22水平明显降低（P<0.05）,IL-10水平明显升高（P<0.05）；外周血中Th17细胞百分率明显降低（P<0.05）,Treg细胞百分率明显升高（P<0.05）,Th17/Treg比值明显减小（P<0.05）。与XBJ-L组比较，XBJ-H组小鼠神经功能损伤评分明显降低（P<0.05）；脑组织中EB水平明显降低（P<0.05）；大脑皮质中ZO-1和Occludin荧光染色强度升高（P<0.05）,ZO-1、Occludin、Claudin-5和NeuN蛋白表达水平明显升高（P<0.05）；血清中IL-17和IL-22水平明显降低（P<0.05）,IL-10水平明显升高（P<0.05）；外周血Th17细胞百分率明显降低（P<0.05）,Treg细胞百分率明显升高（P<0.05）,Th17/Treg比值明显减小（P<0.05）。结论：血必净注射液能够改善抗NMDAR脑炎小鼠BBB损伤，调节Th17/Treg趋于平衡，从而减轻抗NMDAR脑炎神经功能损伤。
关键词：血必净注射液;;抗N-甲基-D-天冬氨酸受体脑炎;;血脑屏障;;神经功能;;辅助性T细胞17;;调节性T细胞
基金资助：海南省科技厅重点研发项目(ZDYF2022SHFZ291)
