来源：期刊VIP网 时间：
作者：戴大有;张志刚;李慧;
单位：上海交通大学医学院附属仁济医院上海市肿瘤研究所,肿瘤系统医学全国重点实验室;
摘要：目的：通过生物信息学方法和细胞实验探讨烟碱型乙酰胆碱受体α5亚基（CHRNA5）对胰腺导管腺癌（PDAC）侵袭和增殖的影响，并分析其调控通路，为寻找新的胰腺癌治疗靶点提供依据。方法：自癌症基因组图谱（TCGA）和基因型组织表达（GTEx）数据库等公共数据库下载泛肿瘤和正常组织的转录组、基因变异和临床数据，利用Wilcoxon检验比较CHRNA5 mRNA在泛肿瘤患者与健康个体中的表达水平。通过基因表达综合数据库（GEO）中的数据集进一步比较胰腺癌和癌旁组织中CHRNA5 mRNA的表达水平，并采用三分法按照CHRNA5 mRNA的不同表达量将数据分为CHRNA5高表达、中表达和低表达组，对CHRNA5高表达和低表达组样本进行生存分析，以评估CHRNA5对胰腺癌预后的影响。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和免疫组织化学法检测CHRNA5在肿瘤组织、癌旁组织、肿瘤细胞和正常细胞中mRNA和蛋白表达情况。对转录组数据进行差异分析和标志基因（Hallmark）与反应组数据库（Reactome）富集分析。基于转录组数据对PDAC进行免疫细胞浸润分析，同时进行肿瘤突变负荷（TMB）分析、单核苷酸变异（SNV）和拷贝数目变异（CNV）分析。将小干扰RNA(si)-NC和si-CHRNA5转染至MIA PaCa-2和Capan-2细胞，作为NC组、siRNA-1组和siRNA-2组，采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测在乙酰胆碱（ACh）(10μmol·L~(-1))和非ACh条件下各组细胞的增殖活性，采用Western blotting法检测各组细胞中c-Myc蛋白表达情况。结果：与正常组织比较，包括胰腺癌在内的28种肿瘤组织中CHRNA5 mRNA表达水平升高（校正后P<0.05）。RT-qPCR和免疫组织化学法检测，与癌旁组织和正常胰腺导管细胞比较，CHRNA5在肿瘤组织和PDAC细胞中高表达。生存分析，高表达CHRNA5的PDAC患者较低表达患者预后差。在PDAC和对照样本中鉴定出994个差异表达基因（DEGs），其中上调基因381个，下调基因613个。基因集富集分析（GSEA）,CHRNA5与氧化磷酸化、细胞增殖、免疫浸润和细胞周期高度有关。免疫分析，高表达CHRNA5的样本较低表达CHRNA5的样本免疫浸润更差。与CHRNA5低表达组比较，CHRNA5高表达组胰腺癌进展相关基因KRAS、TP53和SMAD4基因突变率更高。细胞实验，与NC+Ach组比较，siRNA-1+Ach组和siRNA-2+Ach细胞增殖活性明显降低（P<0.05）。Western blotting法检测，与NC组比较，siRNA-1组和siRNA-2组细胞中c-Myc蛋白表达量降低。结论：CHRNA5通过髓细胞瘤病毒癌基因（MYC）家族调控细胞周期，从而影响胰腺肿瘤细胞的增殖，促进PDAC的进展，表明CHRNA5是治疗胰腺癌的潜在靶点。
关键词：胰腺导管腺癌;;烟碱型乙酰胆碱受体α5亚基;;神经递质;;细胞周期;;肿瘤进展
基金资助：上海市卫健委卫生行业临床研究专项面上项目(202340202)
