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作者：刘景;王艳;黄旭;
单位：新疆医科大学第五附属医院口腔科;
摘要：目的：探讨过表达环状RNA(circRNAs)修饰牙髓干细胞（DPSCs）来源外泌体（Exo）促进人脐静脉内皮细胞（HUVECs）血管生成在牙髓血管再生中的作用，并阐明相关分子机制。方法：分离乳齿源-、成人智齿源-和老年人恒牙源-原代DPSCs。流式细胞术检测3种原代DPSCs表面标志物蛋白阳性表达情况。使用3种来源的DPSCs与HUVECs建立共培养体系，将细胞分为乳牙源-原代DPSCs组、成人智齿源-原代DPSCs组和老年人恒牙源-原代DPSCs组。另将细胞分为Exo-OE vector组、Exo-circ＿0026827 OE组和Exo-circRNA 124534 OE组，分别转染腺病毒介导的OE vector、circ＿0026827 OE和circRNA124534 OE后，分离其细胞培养上清液Exo。细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测各组HUVECs增殖活性，实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组Exo中血管生成相关circRNAs表达水平，Western blotting法检测共培养细胞上清中Exo标志物相关蛋白表达水平。验证各组细胞Exo摄取情况，血管生成-诱导实验检测细胞上清液中Exo分离情况。结果：大部分细胞表面标志物表达情况为白细胞分化抗原44(CD44)（+）、白细胞分化抗原34(CD34)（-）和基质细胞抗原1(Stro-1)（+），鉴定为原代DPSCs。CCK-8法检测，与乳牙源-原代DPSCs组比较，成人智齿源-原代DPSCs组和老年人恒牙源-原代DPSCs组共培养的HUVECs增殖活性明显降低（P<0.01）；与成人智齿源-原代DPSCs组比较，老年人恒牙源-原代DPSCs组共培养的HUVECs增殖活性明显降低（P<0.01）。3种共培养体系细胞培养上清液Exo中白细胞分化抗原9(CD9)、热激蛋白70(HSP70)和肿瘤易感基因101(TSG101)均表达阳性。3种共培养体系细胞上清液中Exo的粒径为50～110 nm。RT-qPCR法检测，与乳牙源-原代DPSCs组比较，成人智齿源-原代DPSCs组和老年人恒牙源-原代DPSCs组Exo中circRNA124534和circ＿0026827 mRNA表达水平均明显降低（P<0.01）；与成人智齿源-原代DPSCs组比较，老年人恒牙源-原代DPSCs组Exo中circRNA124534和circ＿0026827 mRNA表达水平均明显降低（P<0.01）;3组Exo中circ＿信号诱导增殖相关基因1(SIPA1L1) mRNA表达水平比较差异无统计学意义（P>0.05）。Western blotting法检测，与Exo-OE vector组比较，Exo-circ＿0026827 OE组HUVECs中磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶（p-p38 MAPK）、血管内皮生长因子A(VEGF-A)、血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)、血管发生素1(Ang-1)、基质细胞衍生因子1(SDF-1)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达水平均明显升高（P<0.01）；与Exo-OE vector组比较，Exo-circRNA124534 OE组HUVECs细胞中p-p38MAPK、VEGF-A、VEGFR2、Ang-1、SDF-1和MMP-9蛋白表达水平均明显升高（P<0.01）。各组HUVECs均成功摄取Exo。Exo-OE vector组HUVECs呈现较为平铺的生长状态；与Exo-OE vector组比较，Exo-circ＿0026827 OE组和Exo-circRNA124534 OE组HUVECs呈现网状排列的生长状态，并有排列成管状的趋势。结论：过表达circ＿0026827和circRNA124534修饰乳牙DPSCs来源的Exo对HUVECs血管生成有一定促进作用。
关键词：牙髓血管再生;;牙髓干细胞;;人脐静脉内皮细胞;;环状RNAs;;外泌体
基金资助：新疆维吾尔自治区科技厅自然科学基金项目（2021D01C431）
