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作者：官博雅;葛振华;张金红;陈青;徐亮;冯鑫;
单位：天津医科大学药学院;天津市天津医院药学部;
摘要：目的 研究雷公藤多苷(TG)通过转录因子EB(TFEB)-溶酶体途径对骨肉瘤细胞铁死亡的调控作用。方法 培养骨肉瘤U2OS细胞，将其分为对照组、不同浓度TG组(10、20、40、80、160、320μmol/L TG)、对照(NC)组(转染NC siRNA)、NC+TG组(转染NC siRNA联合160μmol/L TG)、si-TFEB+TG组(转染TFEB siRNA联合160μmol/L TG)。CCK-8法检测细胞增殖活力，荧光显微镜检测溶酶体探针LysoTracker的荧光强度，酶标仪检测Fe~(2+)及活性氧(ROS)水平，Western blot检测总蛋白及核蛋白中TFEB的表达水平以及溶酶体相关蛋白[溶酶体相关膜蛋白1(LAMP1)、溶酶体相关膜蛋白2(LAMP2)、组织蛋白酶B(CTSB)、组织蛋白酶D(CTSD)]、铁死亡相关蛋白[谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、溶质载体家族成员SLC7A11(SLC7A11)]的表达水平。结果 不同浓度TG组的存活率均低于对照组(P<0.05)且雷公藤多苷浓度越高、存活率越低；低、中、高浓度TG(40、80、160μmol/L)组的LysoTracker荧光强度及总蛋白中LAMP1、LAMP2、GPX4、SLC7A11的表达水平均低于对照组，Fe~(2+)、ROS水平及核蛋白中TFEB的表达水平、总蛋白中CTSB及CTSD的表达水平高于对照组(P<0.05);si-TFEB质粒TG组的存活率、LysoTracker荧光强度及总蛋白中LAMP1、LAMP2、GPX4、SLC7A11的表达水平均高于NC+TG组，Fe~(2+)、ROS水平及核蛋白中TFEB的表达水平、总蛋白中CTSB及CTSD的表达水平低于NC+TG组(P<0.05)。结论 雷公藤多苷通过促进TFEB入核的方式影响溶酶体功能，进而促进骨肉瘤细胞发生铁死亡。
关键词：骨肉瘤;;雷公藤多苷;;铁死亡;;溶酶体;;转录因子EB
基金资助：国家自然科学基金项目(81402889);; 天津市卫生健康委员会中医中西医结合科研项目(2023176)
