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作者：褚璨灿;陈光磊;郑宇皓;杨长福;朱星;
单位：贵州中医药大学;安顺市人民医院;
摘要：目的 探讨补肺汤通过调控张力素同源物诱导的激酶蛋白1(phosphatase and tensin homolog-induced putative kinase protein 1,PINK1)/RBR结构域的E3泛素连接酶(parkin RBR E3 ubiquitin protein ligase, Parkin)信号通路介导的线粒体自噬水平干预慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease, COPD)肺气虚证的作用机制。方法 将大鼠随机分为对照组和造模组，采用被动吸入烟雾联合气道内滴注脂多糖的方法制造COPD肺气虚证大鼠模型。造模结束后，将造模组大鼠随机分为模型组、补肺汤中剂量组、补肺汤高剂量组、3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine, 3-MA)组。补肺汤中、高剂量组给予补肺汤药液灌胃(7.29、14.58 g·kg~(-1)),3-MA组以3-MA(15 mg·kg~(-1))腹腔注射给药，每组每日药物干预1次，连续干预28 d。苏木素-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色观测肺组织病理改变；透射电镜下观测肺组织中肺泡Ⅱ型上皮细胞超微结构的变化；免疫组化(immunohistochemistry, IHC)检测肺组织中PINK1、Parkin、自噬受体蛋白P62(sequestosome 1,P62/SQSTM1)、微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)蛋白的阳性表达；蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肺组织线粒体中PINK1、Parkin、P62、LC3Ⅱ/LC3I蛋白表达；流式细胞术检测肺组织中线粒体膜电位变化情况；活性氧荧光探针(dichloro-dihydro-fluorescein diacetate, DCFH-DA)、线粒体超氧化物(mitochondrial superoxide, MitoSOX)红色荧光探针经流式细胞仪分别测定肺组织内活性氧(reactive oxygen species, ROS)、线粒体活性氧(mitochondrial reactive oxygen species, mtROS)水平；Western blot检测肺组织中核转录因子-κB P65(nuclear factor-κB P65,NF-κB P65)、磷酸化核转录因子-κB P65(phosphorylation of nuclear factor-κB P65,p-NF-κB P65)蛋白的表达。结果 与对照组相比，模型组的肺组织损伤严重；与模型组相比，补肺汤中、高剂量组和3-MA组的病理损伤均有不同程度改善。与对照组相比，模型组肺组织中肺泡Ⅱ型上皮细胞及其线粒体结构损伤严重，线粒体减少，自噬小体增多；与模型组相比，补肺汤中、高剂量组和3-MA组肺泡Ⅱ型上皮细胞及其线粒体结构损伤程度较轻，线粒体相对增多，自噬小体减少。与对照组相比，模型组肺组织及肺组织线粒体中的PINK1、Parkin、LC3、LC3Ⅱ/LC3I的蛋白表达上调(P<0.01)、P62蛋白表达下调(P<0.01);与模型组相比，补肺汤中、高剂量组和3-MA组肺组织及肺组织线粒体中的PINK1、Parkin、LC3、LC3Ⅱ/LC3I的蛋白表达下调(P<0.05,P<0.01)、P62蛋白表达上调(P<0.01)。与对照组相比，模型组肺组织的线粒体膜电位降低(P<0.01)、ROS和mtROS水平均上调(P<0.01)、NF-κB P65蛋白表达差异无统计学意义、p-NF-κB P65蛋白表达上调(P<0.01);与模型组相比，补肺汤中、高剂量组和3-MA组肺组织的线粒体膜电位升高(P<0.01)、ROS和mtROS水平均下调(P<0.01)、NF-κB P65蛋白表达差异无统计学意义、p-NF-κB P65蛋白表达下调(P<0.01)。结论 补肺汤能抑制肺组织ROS水平以及NF-κB P65的激活，从而减轻COPD肺气虚证肺部氧化损伤和炎症反应，其作用机制可能与抑制PINK1/Parkin信号通路介导的线粒体自噬水平有关。
关键词：补肺汤;;慢性阻塞性肺疾病;;线粒体自噬;;PINK1/Parkin信号通路;;活性氧;;核转录因子-κB
基金资助：国家自然科学基金项目(81960830);; 贵州中医药大学-贵中医创新团队项目(贵中医TD合字[2023]002号)
