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作者：李镇南;张中正;谢抗;庄皓文;王俊岩;
单位：浙江大学药学院;广州中医药大学中药学院;广州中医药大学第一临床医学院;
摘要：目的 观察益气温阳活血利水方(Yiqi Wenyang Huoxue Lishui Recipe,YWHLR)调控混合谱系酶3(mixed lineage kinase 3,MLK3)介导的线粒体未折叠蛋白反应(mitochondrial unfolded protein response,UPRmt)对心肌细胞的保护作用，探讨益气温阳活血利水方防治心力衰竭的作用机制。方法 采用血管紧张素2(angiotensinⅡ，AngⅡ)制备小鼠HL-1心肌细胞损伤模型，分别给予URMC-099、寡霉素A(Oligomycin A)、益气温阳活血利水方干预，分为对照组(Control)、AngⅡ组、AngⅡ+URMC-099组、AngⅡ+Oligomycin组、AngⅡ+YWHLR组，收集上述细胞，采用CCK-8法检测细胞活性; RT-q PCR法检测各组HL-1细胞MLK3及UPRmtmRNA水平[MLK3、C/EBP同源蛋白(C/EBP-homologous protein,CHOP)、线粒体离子肽酶1(lon peptidase 1,mitochondrial,LONP1)、热休克蛋白60(heat shock protein 60,HSP60)、热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)]; Western blot检测各组HL-1细胞MLK3及UPRmt相关蛋白水平(MLK3、CHOP、LONP1、HSP60、HSP70);免疫荧光双标法检测HSP70、MLK3蛋白的表达情况。结果 与对照组相比，AngⅡ组的MLK3表达水平显著上升(P <0.05),CHOP、LONP1、HSP60、HSP70表达水平显著下降(P <0.05);与AngⅡ组相比，AngⅡ+URMC-099组MLK3表达水平显著下降(P <0.05),CHOP、LONP1、HSP60、HSP70表达水平显著上升(P <0.05);与AngⅡ组相比，AngⅡ+Oligomycin组MLK3表达水平差异无统计学意义(P> 0.05),CHOP、LONP1、HSP60、HSP70表达水平显著上升(P <0.05);与AngⅡ组相比，AngⅡ+YWHLR组MLK3表达水平显著下降(P <0.05),CHOP、LONP1、HSP60、HSP70表达水平显著上升(P <0.05)。结论 益气温阳活血利水方可能通过调控MLK3介导的线粒体未折叠蛋白反应发挥保护心肌细胞作用。
关键词：线粒体未折叠蛋白反应;;益气温阳活血利水方;;心力衰竭;;MLK3
基金资助：国家自然科学基金项目(8220150462)
