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作者：欧阳舜;李文龄;丘雨旻;刘张弛;朱秋霞;张美信;徐玲玲;陶军;
单位：中山大学附属第一医院高血压血管病科;中山大学附属第一医院儿科;
摘要：目的 研究M1型巨噬细胞来源外泌体（M1 macrophage exosomes,M1-Exo）调控血管内皮衰老的作用及其相关分子机制。方法 随机选取年轻组和老年组小鼠各6只，比较两组小鼠肱动脉血流介导的血管舒张功能（flowmediated dilation,FMD）。使用溶剂对照（溶剂组）、100 ng/μL的M1-Exo(M1-Exo 100 ng/μL组)、200 ng/μL的M1-Exo(M1-Exo 200 ng/μL组)分别与内皮细胞共培养，观察细胞衰老相关β半乳糖苷酶（senescence-associated β-galactosidase,SA-β-gal）染色情况，共聚焦成像技术检测细胞内线粒体活性氧水平。设置微小RNA(microRNA,miR)-空白对照组、miR-22-3p模拟物组、miR-阴性对照组、miR-22-3p抑制剂组，比较各组沉默信息调节因子2相关酶1(silent mating type information regulation 2 homolog-1,SIRT1)蛋白表达。短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)转染shRNA-SIRT1质粒（sh-SIRT1组），并设置sh-空白对照组（sh-NC组）。蛋白免疫印迹检测两组相关蛋白的表达。结果 与年轻组小鼠比较，老年组小鼠FMD明显下降[（48.330±3.807）%vs(28.650±3.209)%,P<0.05]。体外实验显示，与溶剂刺激比较，M1-Exo 100 ng/μL组、M1-Exo 200 ng/μL组SA-β-gal表达升高，线粒体活性氧水平升高（P<0.05）。与miR-空白对照组比较，miR-22-3p模拟物组SIRT1水平降低；与miR-22-3p模拟物组比较，miR-22-3p抑制剂组SIRT1水平升高，差异均有统计学意义（P<0.5）。与sh-NC组比较，sh-SIRT1组核转录因子κB/细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子P21、叉头蛋白O3α/超氧化物歧化酶2信号通路被激活。结论 M1型巨噬细胞外泌体miR-22-3p具有促进血管内皮细胞衰老的作用。
关键词：内皮细胞;;衰老;;外泌体;;炎症;;巨噬细胞;;微RNAs
基金资助：国家自然科学基金(82270460,823B2009);; 国家资助博士后研究人员计划(GZB20240899);; 广州市重点研发计划(202206080004)
