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作者：杨爽;许娜;张剑旭;孙成彪;王燕;董明鑫;刘文森;
单位：军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所;延边大学医学院生理学与病理生理学教研室;吉林医药学院;
摘要：目的：探讨甜叶悬钩子苷（RUB）对小鼠脊髓损伤（SCI）和神经炎症的影响，并阐明其作用机制。方法：将48只雌性昆明小鼠随机分为假手术组、SCI组、SCI+低剂量RUB组和SCI+高剂量RUB组，每组12只；采用脊髓损伤行为学（BBB）评分法评估SCI小鼠后肢运动功能，脊髓组织含水量法检测SCI小鼠脊髓水肿情况，实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组小鼠促炎细胞因子环氧化酶2 (COX-2)、白细胞介素1β (IL-1β)和肿瘤坏死因子α (TNF-α) mRNA表达水平，ELISA法检测各组小鼠血清中炎症因子水平，HE染色观察各组小鼠脊髓组织病理形态学，免疫荧光法检测各组小鼠脊髓组织中小胶质细胞活化情况，Western blotting法检测SCI小鼠脊髓组织中相关蛋白表达水平。结果：BBB评分，与假手术组比较，SCI组小鼠评分低至0分；与SCI组比较，SCI+低剂量RUB组和SCI+高剂量RUB组小鼠BBB评分逐步升高。脊髓组织含水量法检测，与假手术组比较，SCI组小鼠脊髓组织含水量明显升高（P<0.01）；与SCI组比较，SCI+低剂量RUB组和SCI+高剂量RUB组小鼠脊髓组织含水量明显降低（P<0.01）。RT-qPCR法检测，与假手术组比较，SCI组小鼠脊髓组织中COX-2、 IL-1β和TNF-α mRNA表达水平明显升高（P<0.001）；与SCI组比较，SCI+低剂量RUB组和SCI+高剂量RUB组小鼠脊髓组织中COX-2、IL-1β和TNF-α mRNA表达水平明显降低（P<0.001）。ELISA法检测，与假手术组比较，SCI组小鼠血清中IL-1β (P<0.01)和TNF-α(P<0.001)水平升高；与SCI组比较，SCI+低剂量RUB组和SCI+高剂量RUB组小鼠血清中IL-1β和TNF-α水平降低（P<0.001）;Western blotting法检测，与假手术组比较，SCI组小鼠脊髓组织中核因子κB (NF-κB)抑制因子α (IκB-α)、磷酸化IκB-α (p-IκB-α)、磷酸化p65 (p-p65)、p-65、磷酸化p38 (p-p38)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶（p-ERK）和磷酸化c-Jun氨基末端激酶（p-JNK）蛋白表达水平明显升高（P<0.05或P<0.001）；与SCI组比较，SCI+低剂量RUB组和SCI+高剂量RUB组小鼠脊髓组织中IκB-α、p-IκB-α、p-p65、p-65、p-p38、p-ERK和p-JNK蛋白表达水平明显降低（P<0.001）。HE染色观察，与假手术组比较，SCI组小鼠脊髓组织中可见组织疏松，有空泡形成，脊髓中间有一较大的坏死空洞区域；与SCI组比较，SCI+低剂量RUB组和SCI+高剂量RUB组小鼠脊髓中央坏死空洞区域明显减小（P<0.05）。免疫荧光法检测，与假手术组比较，SCI组小鼠脊髓组织中小胶质细胞阳性细胞数明显增加（P<0.001）；与SCI组比较，SCI+低剂量RUB组和SCI+高剂量RUB组小鼠脊髓组织中小胶质细胞阳性细胞数明显减少（P<0.001）。结论：RUB可改善SCI小鼠运动功能障碍，减轻脊髓组织神经炎症，抑制小胶质细胞活化，其机制可能与下调脊髓组织中NF-κB和丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路相关蛋白表达有关。
关键词：甜叶悬钩子苷;;脊髓损伤;;神经炎症;;核因子κB;;丝裂原活化蛋白激酶
基金资助：吉林省教育厅科学研究项目（JJKH20210503KJ）
