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作者：蔡东红;李青;柯铃铃;钟慧雅;江其龙;张涵;宋雅芳;
单位：广州中医药大学科技创新中心广州中医药大学脾胃研究所;广州中医药大学第一附属医院脾胃病科;广东药科大学中药学院;
摘要：目的：探讨重症肌无力（MG）患者外周血单个核细胞（PBMCs）中线粒体自噬和凋亡相关基因的表达水平，阐明其对MG诊断的指导价值。方法：收集并提取50名健康对照者（对照组）和50例MG患者（MG组）的PBMCs，采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法和Western blotting法检测线粒体自噬因子磷脂酶和张力蛋白同源物（PTEN）诱导激酶1 (PINK1)、 E3泛素连接酶PARK2 (Parkin)、泛素结合蛋白62 (p62)、微管相关蛋白1轻链3 (LC3Ⅱ)及凋亡因子细胞色素C(Cyt-C)、 B细胞淋巴瘤2 (Bcl-2)、 Bcl-2相关X蛋白（Bax）、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶3(caspase 3)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶9 (caspase 9)的mRNA以及蛋白表达水平，根据mRNA检测结果设定多个不同临界值，在每个临界值处计算出相应的灵敏度和特异度，并绘制受试者工作特征（ROC）曲线。结果：与对照组比较，MG组患者PBMCs中的自噬因子PINK1、Parkin和LC3Ⅱ的mRNA及蛋白表达水平明显降低（P<0.01）,p62 mRNA和蛋白表达水平升高（P<0.05或P<0.01）；凋亡因子Cyt-C、 Bax、 caspase3和caspase9 mRNA及蛋白表达水平明显升高（P<0.05或P<0.01）, Cyt-C mRNA和蛋白表达水平升高（P<0.05或P<0.01），而Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平明显降低（P<0.01）。ROC曲线检测，PINK1、Parkin、p62和LC3Ⅱ的ROC曲线下面积（AUC）分别为0.969 6 (95%CI:0.943 5～0.995 7)、0.944 0 (95%CI:0.904 7～0.983 3)、0.855 6(95%CI:0.776 7～0.934 5)及0.908 8 (95%CI:0.852 6～0.965 0)(P<0.01)，灵敏度分别为92%、 92%、 78%和84%，特异度分别为88%、 82%、 92%和82%；而Cyt-C、 Bax、 Bcl-2、caspase 3和caspase 9的AUC均为1.000 (P<0.01)，灵敏度和特异度均达到100%。结论：MG患者PBMCs中存在线粒体自噬障碍和凋亡增加现象，其对临床诊断MG具有较高的指导价值。
关键词：重症肌无力;;线粒体自噬;;细胞凋亡;;外周血单个核细胞;;诊断价值
基金资助：国家自然科学基金面上项目（82374391）;; 广东省科技厅自然科学基金面上项目（2023A1515011127）;; 广东省教育厅生物医药与健康重点领域专项（2021ZDZX2032）
