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作者：王琳茹;张晶;赵冬婵;王晋军;胡文贤;
单位：青岛大学附属青岛市海慈医院青岛市中医医院血管外科;
摘要：目的：探讨叉头框转录因子O1 (FOXO1)基因对腹主动脉瘤（AAA）血管平滑肌细胞自噬和凋亡的影响，阐明其可能的作用机制。方法：收集19例AAA患者动脉瘤组织（AAA组）及邻近正常主动脉组织（对照组），采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测2组研究对象动脉瘤组织中FOXO1 mRNA表达水平，透射电镜观察2组研究对象动脉瘤组织中自噬溶酶体形成情况；Western blotting法检测2组研究对象动脉瘤组织中FOXO1及自噬相关蛋白卷曲螺旋肌球蛋白样B细胞淋巴瘤2 (Bcl-2)结合蛋白（Beclin1）、微管相关蛋白1轻链3 α (LC3)和P62蛋白表达水平。体外培养人主动脉血管平滑肌细胞（hVSMCs），并采用FOXO1 siRNA (si-FOXO1)及其阴性对照（si-NC）慢病毒感染hVSMCs,10μmol·L~(-1)血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）联合自噬激活剂雷帕霉素（Rap）进行干预，将细胞分为空白对照组、Ang Ⅱ组、Ang Ⅱ+si-NC组、Ang Ⅱ+si-FOXO1组、Ang Ⅱ+si-NC+Rap组和Ang Ⅱ+si-FOXO1+Rap组。CCK-8法检测各组细胞增殖活性，流式细胞术检测各组细胞凋亡水平，ELISA法检测各组细胞上清中基质金属蛋白酶2 (MMP-2)和基质金属蛋白酶9 (MMP-9)水平，RT-qPCR法检测各组细胞中FOXO1 mRNA表达水平，Western blotting法检测各组细胞中FOXO1、 Bcl-2、 Bcl-2相关X蛋白（Bax）、剪切型含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3 (Cleaved caspase-3)、 Beclin1、 LC3和P62蛋白表达水平。结果：与对照组比较，AAA组动脉瘤组织中FOXO1 mRNA表达水平升高（P<0.05），自噬溶酶体数量增多（P<0.05）,Beclin1蛋白表达水平和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高（P<0.05）, P62蛋白表达水平降低（P<0.05）。与空白对照组比较，Ang Ⅱ组hVSMCs增殖活性降低（P<0.05），细胞凋亡率升高（P<0.05），细胞上清中MMP-2和MMP-9水平升高（P<0.05），细胞中Bax、 Cleaved caspase-3和Beclin1蛋白表达水平及LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ比值升高（P<0.05）,Bcl-2和P62蛋白表达水平降低（P<0.05）；与Ang Ⅱ+si-NC组比较，Ang Ⅱ+si-FOXO1组hVSMCs增殖活性升高（P<0.05），细胞凋亡率降低（P<0.05），细胞上清中MMP-2和MMP-9水平降低（P<0.05），细胞中Bax、Cleaved-caspase-3和Beclin1蛋白表达水平及LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ比值降低（P<0.05）, Bcl-2和P62蛋白表达水平升高（P<0.05）。与Ang Ⅱ+si-FOXO1组比较，Ang Ⅱ+si-FOXO1+Rap组细胞凋亡率升高（P<0.05），细胞上清中MMP-2和MMP-9水平升高（P<0.05），细胞中Beclin1蛋白表达水平和LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ比值降低（P<0.05）,P62蛋白表达水平升高（P<0.05）。结论：FOXO1基因沉默可能通过降低自噬水平来提高Ang Ⅱ暴露下hVSMCs增殖活性，并抑制其凋亡，从而参与AAA的发病。
关键词：腹主动脉瘤;;人血管平滑肌细胞;;叉头框转录因子O1;;自噬;;细胞凋亡
基金资助：国家自然科学基金项目（82172095）;; 山东省科技厅自然科学基金项目（ZR2022ME083）;; 山东省卫健委中医药科技发展计划项目（2019-WJZD045）;山东省卫健委医药卫生科技发展项目（202104130109）
