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作者：王梦娜;汪元;曹周芳;黄旦;孙艳秋;孙玥;王露琳;
单位：安徽中医药大学第一临床医学院;安徽中医药大学第一附属医院;芜湖市中医院;
摘要：目的 探讨新风胶囊对脂多糖(LPS)诱导的类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(RA-FLS)的影响。方法 构建LPS诱导的RA-FLS炎症模型；SD大鼠灌胃给药制备新风胶囊含药血清；双荧光素酶报告分析miR-223-3p和NLRP3的靶向关系；构建miR-223-3p抑制表达质粒(inhibitor)及阴性对照组，转染至RA-FLS中；分为LPS组、mimics NC组、mimics组、inhibitor NC组、inhibitor组；同时设置NC-FLS组、RA-FLS组、LPS组、新风胶囊组、新风胶囊+inhibitor-NC组、新风胶囊+inhibitor组、新风胶囊+inhibitor+MCC950组。采用CCK-8试剂盒法检测细胞增殖，流式细胞术检测RA-FLS细胞焦亡的改变；ELISA法检测IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8水平；RT-qPCR法检测NLRP3、Caspase-1、GSDMD mRNA及miR-223-3p miRNA表达；Western blot法检测NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白表达。结果 筛选得出20%新风胶囊为最佳含药血清浓度。双荧光素酶报告基因说明miR-223-3p与NLRP3存在结合位点。与NC-inhibitor比较，转染miR-223-3p inhibitor后细胞焦亡增多，IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8水平升高，同时NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白及mRNA表达升高；与NC-mimics比较，转染miR-223-3p mimics后则出现相反的结果。与模型组比较，新风胶囊含药血清组IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8水平降低，miR-223-3p miRNA表达升高，同时NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白及mRNA表达降低，细胞焦亡改善。结论 新风胶囊能够减轻炎症反应，减少细胞焦亡，其机制可能与调控miR-223-3p/NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号轴有关。
关键词：新风胶囊;;类风湿关节炎;;滑膜成纤维细胞;;miR-223-3p/NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号轴;;细胞焦亡
基金资助：国家中医药传承创新项目基金(发改办社会[2022]366号);; 国家高水平中医药重点学科中医痹病学(国中医药人教涵[2023]85号);; 安徽省高等学校科学研究项目(2023AH050810);; 安徽省青年领军后备人才支持项目(中发展[2022]4号);; 新安医学教育部重点实验室开放基金项目(2020xayx01)
