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作者：樊俐慧;王志刚;杨霞;
单位：甘肃中医药大学中医临床学院;天水市中医医院;
摘要：目的 基于网络药理学方法预测葛连调糖丸对2型糖尿病(T2DM)的潜在靶点与信号通路，并应用分子对接和体外实验验证。方法 通过TCMSP数据库检索葛连调糖丸药材成分，GeneCards数据库预测T2DM的疾病靶点，Venny 2.1.0获取葛连调糖丸与T2DM的交集靶点，STRING数据库获取蛋白质相互作用网络，运用R语言软件对核心靶点进行GO功能和KEGG通路富集分析，Cytoscape 3.9.1软件构建“药材-活性成分-靶点”及“关键活性成分-核心靶点-通路”网络，利用Pymol软件进行分子对接。将20只大鼠随机分为空白血清组和葛连调糖丸含药血清组，每组10只，CCK-8法筛选不同浓度含药血清对HepG2细胞活力的影响。采用含生理浓度葡萄糖(5.5 mmol/L)或高糖(30 mmol/L)培养液孵育24 h,诱导建立胰岛素抵抗细胞模型，将对数生长期的HepG2细胞随机分为正常组、模型组、葛连调糖丸组、RAGE激动剂(D-Ribose)组、葛连调糖丸+RAGE激动剂组。收集细胞培养上清，CCK-8法检测HepG2细胞活力，TUNEL法检测HepG2细胞凋亡情况，免疫荧光法检测AGE蛋白表达，Western blot法检测细胞RAGE、Bcl-2、caspase-3、cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达。结果 葛连调糖丸抗T2DM的活性成分有200个，其中有18个关键活性成分，16个核心靶点；GO功能富集分析得到75个生物过程；KEGG富集分析得到157条信号通路，其作用机制可能与糖尿病并发症中的AGE-RAGE信号通路、IL-17信号通路、内分泌抵抗等通路相关。分子对接结果表明，关键活性成分与核心靶点均可自发结合。细胞实验表明，10%葛连调糖丸含药血清干预成模后的HepG2细胞24 h,能提高细胞活力(P<0.01),抑制细胞凋亡(P<0.01),升高Bcl-2蛋白表达(P<0.01),降低AGE、RAGE、caspase-3、cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达(P<0.05,P<0.01);而RAGE激动剂可逆转葛连调糖丸含药血清对胰岛素抵抗细胞模型中Bcl-2、caspase-3、cleaved-caspase-3和Bax蛋白表达的改变(P<0.05,P<0.01)。结论 葛连调糖丸具有多成分、多靶点和多途径协同缓解T2DM的特点，其作用机制可能与抑制AGE-RAGE信号通路，促进细胞增殖，降低细胞凋亡，减轻胰岛素抵抗相关。
关键词：葛连调糖丸;;2型糖尿病;;网络药理学;;分子对接;;细胞实验;;HepG2细胞;;AGE-RAGE信号通路
基金资助：甘肃省中医药科研课题(GZKP-2021-46);; 甘肃省中医药综合防治重大疑难疾病科技攻关项目(GZKZD-2018-01);; 甘肃省产业支撑计划项目(2021CYZC-03);; 天水市科技支撑计划项目(2020-SHFZKJK-4207)
