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作者：郭淑杰;谢淑敏;余海艳;陈朝华;常万顺;朱艳慧;吴灿;黄海英;
单位：河南中医药大学药学院;河南省儿童医院郑州儿童医院;
摘要：目的 制备负载连翘酯苷A(Forsythiaside A,FTA)的人脐带间充质干细胞(Human umbilical cord mesenchymal stem cells,HucMSC)外泌体(Exosomes,Exos)，并基于鞘氨醇-1-磷酸(Sphingosine-1-phosphate,S1P)/磷脂酰肌醇3-激酶(Phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B1(Protein kinase B1,AKT1)信号通路研究其对急性肺损伤(Acute lung injury,ALI)的作用机制。方法 提取Huc MSC-Exos，制备FTA-Exos，并通过马尔文粒度分析仪、透射电子显微镜和蛋白质印迹(Western blot,WB)实验对其表征，高效液相色谱法测定FTA-Exos的载药量。通过脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激人支气管上皮细胞(Human bronchial epithelioid cells,BEAS-2B)构建ALI细胞模型，将其分为对照组、模型组、FTA组和FTA-Exos组。激光共聚焦显微镜观察BEAS-2B对FTA-Exos的摄取效果。流式细胞术检测各组细胞中活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平。WB实验检测各组细胞中S1P、PI3K、AKT1蛋白表达水平。结果Huc MSC-Exos和FTA-Exos的粒径和形态均符合外泌体的生物学特征，且阳性表达标志蛋白热休克蛋白70(Heat shock protein 70,HSP70)、肿瘤易感基因101(Tumor susceptibility gene 101,TSG101)和白细胞分化抗原81(Cluster of differentiation 81,CD81),FTA-Exos载药量为(8.11±0.36)%。FTA-Exos可被BEAS-2B有效摄取，且荧光强度在4 h时显著增强。与对照组比较，ALI细胞模型组ROS水平和S1P、PI3K、AKT1蛋白表达水平均显著升高(P<0.01);与模型组比较，FTA组和FTA-Exos组ROS水平和S1P、PI3K、AKT1蛋白表达水平均显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论研究成功制备了FTA-Exos，并证明其可以通过影响ROS水平及S1P/PI3K/AKT1信号通路对ALI细胞模型起到调节作用，为FTA治疗ALI方向的开发应用提供了新思路。
关键词：连翘酯苷A;;人脐带间充质干细胞外泌体;;急性肺损伤;;活性氧;;S1P/PI3K/AKT1信号通路
基金资助：国家自然科学基金青年科学基金项目(81904021,82204736,82404876);; 河南省省级科技研发计划项目联合基金项目(222301420090);; 河南省“十四五”规划重点项目(2023JKZD16);; 河南中医药大学研究生科研创新能力提升计划项目(2023KYCX067)
