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作者：曹倩荣;刘春卯;郑翔;贾振华;吴芳彤;
单位：河北省微生物研究所有限公司;
摘要：试验旨在优化枯草芽孢杆菌工程菌株WB800N/pHT43-npr-PrsA的发酵蛋白酶活性，为国内饲用蛋白酶企业提供技术支持。试验对发酵过程进行葡萄糖含量和比消耗速率监测，确定碳源、氮源对该菌株葡萄糖消耗的动态影响。通过单因素和响应面试验对发酵培养基成分进行优化。结果显示：以0～10 h菌体OD600 nm值为参数优化发酵培养基，以促进菌体生长，获得更高菌体量。10 h以后以酵母粉5 g/L、蛋白胨70 g/L进行补料，延长稳定期，以达到最大单位酶活性。优化发酵培养基的培养条件为：酵母粉60 g/L、蛋白胨30 g/L、消旋葡萄糖10 g/L、MgSO4 3 g/L，发酵8 h时，添加0.5‰异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）和2‰蛋白酶抑制剂，最终发酵蛋白酶活性为1 156 U/mL。研究表明，延迟稳定期能够提高培养基中蛋白胨含量，有利于提高菌体对葡萄糖比消耗速率，蛋白胨对菌体适应周围环境有促进作用，发酵过程中维持葡萄糖浓度处于较低的水平，可以有效避免乙酸生成，促进菌体生长和提高产酶效能，使菌体对底物的消耗保持最旺盛状态。
关键词：蛋白酶;;工程菌株;;酶活性;;发酵工艺
基金资助：河北省科学院科技计划项目（项目编号：23315）
