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作者：许润香;李佩霖;田家仪;汤杰;尹博丰;虞富豪;王飞燕;李晓彤;张晓宇;夏文戎;朱恒;丁丽;
单位：空军军医大学研究生院;空军军医大学空军特色医学中心血液科;北京辐射医学研究所;河北北方学院研究生院;安徽医科大学基础医学院;河北大学生命科学院;军事科学院军事医学研究院;
摘要：目的：借助急性移植物抗宿主病（aGVHD）模型小鼠血清，建立模拟aGVHD骨髓微环境损伤的体外细胞模型，并探究aGVHD小鼠血清对间充质干细胞（MSC）成脂分化能力的影响。方法：以6-8周龄C57BL/6N雌鼠和BALB/c雌鼠分别作为aGVHD模型的供鼠和受鼠。全身照射致死剂量（8.0 Gy,72.76 cGy/min）γ射线后4-6 h内，受鼠经尾静脉输注供鼠来源骨髓细胞（每只1×107），以建立骨髓移植（BMT）小鼠模型（20只）；经尾静脉输注供鼠来源骨髓细胞（每只1×107）及脾脏淋巴细胞（每只2×106）混合液共0.4 ml，以建立aGVHD小鼠模型（20只）。于造模后d 7眼球取血后收集小鼠血清。分离1周龄C57BL/6N雄鼠骨髓来源MSC，分别在培养基中添加2%、5%和10%的BMT小鼠血清和aGVHD小鼠血清培养。通过油红O染色检测两组血清对小鼠MSC体外成脂分化能力的影响；Western blot检测相关蛋白PPARγ、CEBPα的表达水平；实时荧光定量PCR检测成脂关键转录因子PPARγ、CEBPα、FABP4和LPL的表达差异。结果：成功建立了模拟小鼠aGVHD骨髓微环境损伤的体外细胞模型。油红O染色结果表明，与BMT组相比，aGVHD组血清浓度为10%时，橘红色脂滴数目明显减少，MSC成脂分化能力受损；Western blot实验表明，MSC表达成脂相关蛋白PPARγ、CEBPα下调；进一步实时荧光定量PCR检测结果表明，MSC成脂关键转录因子PPARγ、CEBPα、FABP4和LPL生成显著减少。结论：aGVHD小鼠血清抑制MSC成脂分化能力。
关键词：造血干细胞移植;;急性移植物抗宿主病;;骨髓微环境;;间充质干细胞;;成脂分化
基金资助：北京自然科学基金（7242141,7192203,7182123,L212065）;; 国家干细胞重点研发专项（2022YFA1103500,2022YFA1104100）;; 国家自然科学基金（82172388,81871771,81500083,81572159）
