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作者：李军;马群;李婷;张楠楠;
单位：贵州中医药大学基础医学院;
摘要：目的 探讨石斛碱调控铁死亡干预糖尿病肾病(DKD)的作用机制。方法 采用Pharmmapper、Swiss Target Prediction、Chemmapper、ChemBL、中医分子力的生物信息学分析工具(BATMAN-TCM)和蛋白质数据库(Uniprot)筛选石斛碱靶点；从在线人类孟德尔遗传(OMIM)、治疗靶点数据库(TTD)、Drug bank、Gene cards和Ferroptosis基因数据库(FerrDb)中获得DKD和铁死亡相关靶点，并利用韦恩图获得交集靶点；利用注释、可视化和综合发现数据库(DAVID)平台进行基因本体论(GO)及京都基因与基因组百科全书(KEGG)共同目的分析；通过Cytoscape3.9.1进行蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)分析与网络构建；通过Nephroseq v5进行临床相关性分析；通过SangerBox进行受试者工作特征(ROC)曲线分析；通过DS BIOVIA Discovery Studio2019软件用于分子对接验证，后采用分子动力学(MD)模拟再一次验证；采用Western印迹实验检测细胞外调节蛋白激酶(ERK)1/2、P-ERK1/2蛋白表达。结果 共获得石斛碱作用靶点504个，DKD作用靶点4 262个，铁死亡靶点847个，交集靶点47个，枢纽靶点10个；差异表达及ROC曲线分析结果显示，缺氧诱导因子(HIF)1A、非受体酪氨酸激酶(SRC)、zeste果蝇增强子的同系物(EZH)2、ERK2、MAPK14具有显著差异表达；分子对接结果表明，ERK2能很好地与石斛碱小分子结合；分子动力学模拟结果显示，石斛碱与ERK2及MAPK14结合亲和力较高，表明其内在的高生物活性；Western印迹证实，石斛碱可显著下调P-ERK1/2蛋白表达(P<0.001)。结论 石斛碱通过抑制ERK1/2的活化调控铁死亡进而干预DKD。
关键词：石斛碱;;细胞外调节蛋白激酶(ERK)1/2;;铁死亡;;糖尿病肾病;;分子动力学模拟
基金资助：贵州省基础研究计划(自然科学)项目(黔科合基础-ZK[2023]一般428);; 贵州省卫生健康委科学技术基金(gzwkj2023-266);; 2023年贵州中医药大学研究生教育创新计划项目(YCXKYS2023004)
