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作者：郭呈斌;吴涛;
单位：洛阳市中医院中医科;河南推拿职业学院基础医学部;
摘要：目的 探讨微小RNA(miR)-433-3p和p21激活激酶(PAK)4表达对胃癌细胞增殖、凋亡及DNA损伤的影响机制。方法 提取癌症和肿瘤基因图谱(TCGA)数据库中211个正常组织及408个胃癌组织的芯片数据，R软件统计分析PAK4在胃癌中的表达；另选取手术切除的145例胃癌患者的癌组织及癌旁组织作为研究对象，聚合酶链反应(PCR)检测、免疫组化及Western印迹检测PAK4表达。双荧光素酶实验证明miR-433-3p和PAK4的关系。细胞实验分为Control组、siRNA-PAK4(si)组、siRNA-PAK4-NC(si-NC)组、pcDNA3.1-PAK4(pc)组、pcDNA3.1-PAK4-NC(pc-NC)组、miR-433-3p-mimic(mimic)组、miR-433-3p-mimic+pcDNA3.1-PAK4(mimic+pc)组；5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EDU)试剂盒检测细胞的增殖性能；吖啶橙(AO)染色检测细胞的凋亡率；细胞免疫荧光检测细胞中DNA损伤组蛋白家族2(γH2AX)及共济失调毛细血管扩张突变蛋白(ATM)表达；Western印迹检测细胞和瘤体组织中PAK4、增殖细胞核抗原(PCNA)和凋亡相关因子半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶(caspase)-3表达。结果 PAK4在胃癌中表达明显高于癌旁组织；患者的临床分级越高，PAK4表达越高，PAK4低表达患者具有更高的生存曲线。双荧素酶结果证实miR-433-3p靶向PAK4表达。过表达PAK4增强细胞增殖，下调其凋亡率，推动G1/S2的转换，降低γH2AX、ATM的荧光强度和caspase-3表达，升高PCNA表达，差异有统计学意义(P<0.05)。miR-433-3p-mimic抑制胃癌的进展，mimic+pc能够部分逆转miR-433-3p mimic对胃癌MKN45细胞的抑癌效应，并且mimic+pc能部分抑制pcDNA3.1-PAK4对胃癌MKN45细胞的致癌效应，差异有统计学意义(均P<0.05)。结论 miR-433-3p靶向PAK4调控胃癌MKN45细胞的增殖、凋亡及DNA损伤。
关键词：微小RNA-433-3p;;p21激活激酶4;;胃癌;;增殖;;凋亡;;DNA损伤
