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作者：吴曼殊;李治君;杨健睿;张军;郝晋瑶;
单位：通用医疗汉中三二〇一医院检验科;通用医疗汉中三二〇一医院心内科;
摘要：目的 探究非瑟酮通过上调沉默信息调节因子相关酶(Sirt)1/核因子E2相关因子(Nrf)2/血红素加氧酶(HO)-1信号通路对缺氧/复氧诱导的心肌细胞铁死亡的影响及作用机制。方法 体外培养大鼠心肌细胞H9c2,进行缺氧/复氧处理后建立缺氧/复氧模型，采用噻唑蓝(MTT)法检测经0、5、10、20、40、60μmol/L非瑟酮处理24 h后的细胞活力，并以姬姆萨染色观察不同浓度非瑟酮处理后H9c2细胞形态，筛选出合适非瑟酮作用浓度。将H9c2细胞随机分为对照组、模型组、非瑟酮组、EX527(Sirt1抑制剂)组、非瑟酮+EX527组，除对照外其余各组构建缺氧/复氧模型，采用非瑟酮、EX527分组处理后，以MTT法检测各组细胞活力；以透射电镜观察各组H9c2细胞超微结构；以酶标仪测量各组H9c2细胞乳酸脱氢酶(LDH)、白细胞介素(IL)-6、IL-17、IL-18释放水平及铁死亡相关指标谷胱甘肽(GSH)与丙二醛(MDA)水平、铁含量、活性氧(ROS)相对水平；以Western印迹法检测各组H9c2细胞铁死亡相关蛋白长链脂酰辅酶A合成酶(ACSL)4、溶质载体家族7成员(SLC7A)11、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)4及Sirt1/Nrf2/HO-1通路蛋白表达。与对照组相比，模型组细胞形态和超微结构发生严重损伤，细胞活力、GSH水平、SLC7A11及GPX4、Sirt1、Nrf2、HO-1蛋白表达降低，LDH释放量、培养基上清中IL-17、IL-18及IL-6水平、细胞ROS相对水平、铁含量及MDA水平、ACSL4蛋白表达升高，差异显著(P<0.05)。与模型组相比，非瑟酮组细胞形态和超微结构损伤减轻，细胞活力、GSH水平、SLC7A11及GPX4、Sirt1、Nrf2和HO-1蛋白表达升高，LDH释放量、培养基上清中IL-17、IL-18及IL-6水平、细胞ROS相对水平、铁含量及MDA水平和ACSL4蛋白表达降低，差异显著(P<0.05);EX527组细胞形态和超微结构损伤加重，细胞活力、GSH水平、SLC7A11及GPX4、Sirt1、Nrf2、HO-1蛋白表达降低，LDH释放量、培养基上清中IL-17、IL-18及IL-6水平、细胞ROS相对水平、铁含量及MDA水平和ACSL4蛋白表达升高，差异显著(P<0.05)。与非瑟酮组相比，非瑟酮+EX527组细胞形态和超微结构损伤加重，细胞活力、GSH水平、SLC7A11及GPX4、Sirt1、Nrf2和HO-1蛋白表达降低，LDH释放量、培养基上清中IL-17、IL-18及IL-6水平、细胞ROS相对水平、铁含量及MDA水平和ACSL4蛋白表达升高，差异显著(P<0.05)。结论 非瑟酮可上调Sirt1/Nrf2/HO-1通路，减轻炎症与脂质过氧化，抑制缺氧/复氧诱导的心肌细胞铁死亡，改善细胞损伤。
关键词：非瑟酮;;沉默信息调节因子相关酶(Sirt)1/核因子E2相关因子(Nrf)2/血红素加氧酶(HO)-1;;缺氧/复氧;;心肌细胞;;铁死亡
