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作者：施丽娟;张艳美;朱中博;杨玉洁;刘喜平;
单位：甘肃中医药大学甘肃省中药新产品创制工程实验室;甘肃中医药大学甘肃省中医方药挖掘与创新转化重点实验室;
摘要：目的 筛选半夏泻心汤增敏人胃癌耐药AGS/DDP细胞化疗敏感性的最佳有效部位并探究其化学成分和作用机制。方法 采用加热回流方法提取半夏泻心汤水提液，并利用有机溶剂萃取法将半夏泻心汤水提液分离为醇沉、石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇和水部位。CCK8法检测半夏泻心汤及不同极性部位对AGS/DDP细胞活力的影响；采用超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)对半夏泻心汤最佳有效部位的化学成分进行定性和相对定量分析；流式细胞术及Western blot法检测空白组(AGS/DDP细胞)、最佳有效部位(部位Ⅳ)组、DDP组及联合组(部位Ⅳ+DDP)各组中AGS/DDP细胞凋亡率及耐药蛋白MRP1和LRP1表达；使用PI3K抑制剂LY294002干预AGS/DDP细胞，Western blot法检测AGS组、AGS/DDP组、部位Ⅳ组、PI3K抑制剂组中PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt的表达。结果 CCK8结果显示，二氯甲烷部位(部位Ⅳ)为半夏泻心汤增敏人胃癌耐药AGS/DDP细胞化疗敏感性的最佳有效部位。UPLC-MS/MS结果显示，部位Ⅳ主要含有黄酮类、生物碱类、酚酸类、类固醇、甾体类物质。与空白组比较，DDP组AGS/DDP细胞凋亡率升高(P<0.05);与DDP组比较，联合组AGS/DDP细胞凋亡率升高(P<0.01)。与AGS/DDP组比较，部位Ⅳ组和LY294002组细胞p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt蛋白表达均降低(P<0.05)。结论 二氯甲烷部位(部位Ⅳ)为半夏泻心汤增敏人胃癌耐药AGS/DDP细胞化疗敏感性的最佳有效部位，该部位主要为黄酮类物质，其作用机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路有关。
关键词：半夏泻心汤;;UPLC-MS/MS;;二氯甲烷部位;;胃癌;;化疗耐药;;PI3K/Akt信号通路
基金资助：国家自然科学基金项目(82260895);; 甘肃省青年科技基金(23JRRA1729);; 甘肃省中药新产品创制省级工程实验室开放基金(ZYXCP-24-06)
