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作者：靳新顺;冉旭华;闻晓波;
单位：海南大学热带农林学院;
摘要：试验旨在探究3C蛋白特定氨基酸位点突变对塞内卡病毒A(SVA)复制能力的影响。以野生毒株CHN/SVA/HB/2018(WT)为研究材料，结合3C蛋白结构信息，采用生物信息学分析方法筛选出关键位点，预测突变前后氢键网络和蛋白结构变化，并通过无污染的IBRS-2细胞拯救出突变病毒，测定病毒滴度和生长曲线，使用荧光定量PCR(RT-qPCR)检测突变毒株转录水平。结果显示，33位氨基酸（Q33）折叠自由能最高，而145位氨基酸（Y145）空间位置最远。Q33和Y145突变为赖氨酸后，等电点升高、不稳定指数下降并且氢键网络减少，3C结合槽的微结构域也发生改变。突变毒株生长趋势与WT相似，但病毒滴度和转录能力极显著低于WT(P<0.01)。研究表明，WT的3C蛋白中Q33和Y145可能是影响病毒复制的关键位点。利用反向遗传操作对3C蛋白进行替换突变，可降低蛋白结构稳定性，影响3C活性，降低病毒增殖能力和复制能力，使其具备成为SVA弱毒活疫苗候选毒株的潜力。
关键词：生物信息学分析;;塞内卡病毒(SVA);;3C蛋白;;生长特性
基金资助：海南省自然科学基金资助项目(项目编号:320RC461);; 海南省现代农业产业技术体系建设专项(项目编号:HNARS2022-02-G04)
