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作者：郝健亨;任佳;常博雅;王海军;冀来喜;
单位：山西医药学院;山西中医药大学;
摘要：目的 探讨“秩边透水道”针法通过调节卵巢线粒体功能障碍改善卵巢低反应(poor ovarian response, POR)小鼠生殖功能的作用机制。方法 将筛选后动情周期规律的小鼠随机分成空白组、模型组和针刺组。模型组和针刺组小鼠给予雷公藤多苷混悬液(50 mg·kg~(-1)·d~(-1))灌胃2周，空白组给予等体积的0.9%氯化钠溶液灌胃。造模完成后针刺组小鼠给予“秩边透水道”连续针刺治疗2周，1次/d, 20 min/次，然后3组同时进行促排卵，次日完成取材。采用阴道脱落细胞涂片观察小鼠的动情周期变化；检测小鼠的获卵数、卵巢湿重与卵巢指数；使用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测血清中抗米勒管激素(anti-mullerian hormone, AMH)、促卵泡生成素(follicle-stimulating hormone, FSH)、雌二醇(estradiol, E2)、促黄体生成激素(luteinizing hormone, LH)的含量；通过苏木素-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色和透射电镜观察卵巢的病理和超微结构改变；荧光染色检测卵巢组织线粒体膜转换孔通透性(mitochondrial permeability transition pore, MPTP)改变；荧光定量PCR法检测卵巢组织核呼吸因子1(nuclear respiratory factor1,NRF1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助活化因子1(peroxlsomeproliferator-activated receptor-γ coactlvator-1α,PGC-1α)和线粒体转录因子(mitochondrial transcription factor A,TFAM)mRNA表达水平；脱氧核苷酸转移酶dUTP末端标记(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end labeling, TUNEL)染色法检测卵巢组织阳性细胞凋亡率；免疫印迹法(Western blot)检测卵巢组织B淋巴细胞瘤-2(b-cell lymphoma-2,BCL-2)、BCL-2关联X的蛋白(BCL-2 associated x, BAX)、细胞色素C(cytochrome c, Cyt C)、半胱氨酸蛋白酶(cysteine-aspartic acid protease, Caspase)-9、Caspase-3蛋白表达水平。结果 与空白组比较，模型组小鼠动情周期紊乱率升高(P<0.01);获卵数、卵巢湿重和卵巢指数降低(P<0.01);血清中FSH和LH含量升高(P<0.01),AMH和E2含量下降(P<0.01);卵巢组织病理形态和内部线粒体形态结构变差；线粒体膜通透性提高(P<0.01);PGC-1α、NRF1和TFAM mRNA表达水平降低(P<0.01);阳性细胞凋亡量提高(P<0.01);BAX、Cyt C、Caspase-9、Caspase-3蛋白表达水平提高(P<0.01,P<0.05),BCL-2蛋白表达水平降低(P<0.01)。与模型组相比，针刺组小鼠动情周期紊乱率降低(P<0.01);获卵数、卵巢湿重和卵巢指数提高(P<0.01);血清中FSH和LH含量降低(P<0.01),AMH和E2含量提高(P<0.01);卵巢组织病理形态和内部线粒体结构改善；线粒体膜通透性降低(P<0.01);PGC-1α、NRF1和TFAM mRNA表达水平提高(P<0.01,P<0.05);阳性细胞凋亡量降低(P<0.01);BAX、Cyt C、Caspase-9、Caspase-3蛋白表达水平降低(P<0.01,P<0.05),BCL-2蛋白表达水平提高(P<0.01)。结论 “秩边透水道”针法可能通过调节线粒体生物合成和线粒体凋亡途径的关键因子，改善POR小鼠卵巢线粒体功能障碍，减少卵巢颗粒细胞凋亡，提高卵巢反应性。
关键词：秩边透水道;;针刺;;卵巢低反应;;线粒体功能;;凋亡
基金资助：国家自然科学基金项目(82074549);; 山西省中医药管理局基金项目(2023ZYYB048);; 山西省教育厅基金项目(2023L187)
