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作者：包敏;蔺晓慧;张晓晖;段超;
单位：内蒙古自治区人民医院眼科;
摘要：目的 研究Klotho蛋白对糖尿病视网膜病变(DR)所致色素上皮细胞(RPE)损伤的保护作用及机制。方法建立DR色素上皮细胞模型，分别孵育30 min和16 h时，通过辣根过氧化酶(HRP)追踪法测定低糖(低糖组，5 mmol/L葡萄糖培养)与高糖(高糖组，25 mmol/L葡萄糖培养)时的吞噬水平及高糖和重组Klotho蛋白干预条件下(治疗组)其吞噬功能水平。基于Transwel小室分组检测Klotho加入后RPE细胞中血管内皮生长因子(VEGF)表达的变化，通过Western印迹法测定各剂量Klotho干预后，RPE细胞中胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)、VEGF受体(VEGFR) 2磷酸化蛋白表达的变化。结果体外培养ARPE-19细胞发现，高糖组RPE细胞吞噬功能显著高于低糖组(P<0.01);与高糖组比较，治疗组孵育30 min吞噬能力显著降低(P<0.01 )，而孵育16 h时显著提升(P<0.01)。随后在重组人Klotho处理极化的RPE细胞后，Transwell小室中上室、下室VEGF分泌均显著减少(P<0.01 )，进一步证实了Klotho蛋白能够抑制VEGF的分泌。Western印迹检测结果:Klotho浓度在20 ng/ml和40 ng/ml时明显抑制IGF-1R磷酸化(P<0.01)，表明Klotho可以通过抑制RPE中的IGF-1信号传导来抑制VEGF分泌。同时Klotho蛋白对VEGFR2磷酸化检测显示p-VEGFR2随Klotho蛋白增加，表达呈下降趋势(P<0.01)，表明Klotho可以抑制VEGFR2信号通路来降低VEGF的表达。结论 Klotho蛋白通过抑制IGF-1R、VEGFR2磷酸化来降低RPE细胞分泌VEGF，从而起到缓解DR的作用。
关键词：糖尿病;;Klotho蛋白;;糖尿病视网膜病变;;视网膜色素上皮细胞
基金资助：内蒙古自治区卫生健康委医疗卫生科技计划项目(202202029)
