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作者：肖韩艳;王子杰;孙磊;李岩;
单位：常州市第四人民医院神经内科;常州市第四人民医院胃肠外科;常州市第四人民医院超声科;
摘要：目的 通过体外和体内实验探讨槲皮素在动脉粥样硬化(AS)中抗细胞焦亡的作用及分子机制。方法 体内实验:采用载脂蛋白(APO) E~(-/-)小鼠高脂饮食构建AS模型，分为对照(Control)组、高脂饮食(HFD)组及槲皮素低、中、高剂量干预组(LD、MD、HD组)。通过油红O染色评估主动脉窦区斑块面积，免疫组化检测巨噬细胞浸润，Western印迹检测主动脉组织中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白(NLRP) 3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白水解酶(Caspase)-1、消皮菌素(GSDM) D-N、白细胞介素(IL)-1β等焦亡相关蛋白表达，酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清炎症因子[IL-1β、IL-6、IL-18、肿瘤坏死因子(TNF)-α]水平。体外实验:提取C57BL/6J小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDM)，使用50μg/ml氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导泡沫细胞形成，CCK-8法筛选槲皮素安全浓度范围(0～100μmol/L)并检测细胞活力，乳酸脱氢酶(LDH)释放实验评估细胞焦亡程度，Western印迹检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶(AKT)/核因子(NF)-κB通路关键蛋白(p-PI3K、p-AKT、p-P65)及焦亡相关蛋白表达。结果 HD组小鼠体质量减轻，主动脉窦区脂质沉积减少，斑块面积缩小; HFD组血清IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α水平均显著升高(P<0.05)，槲皮素干预后呈剂量依赖性下降，其中HD组IL-1β接近对照组水平; HFD组NLRP3、ASC、Caspase-1、GSDMD-N、IL-1β表达显著升高(P<0.05)，槲皮素干预后各蛋白表达剂量依赖性降低，HD组多数指标恢复至接近对照组; ox-LDL诱导后，BMDM中NLRP3炎症小体及其下游蛋白表达显著上升，LDH释放明显增加，细胞活力明显下降(P<0.05);槲皮素(50μmol/L)可显著逆转上述变化，并抑制PI3K/AKT/NF-κB通路活化，表现为p-PI3K、p-AKT、p-P65磷酸化水平明显下降(P<0.05)。结论 槲皮素在体内外均能有效抑制动脉粥样硬化相关细胞焦亡，其机制可能与调控PI3K/AKT/NF-κB信号通路、下调NLRP3炎症小体活化及下游焦亡执行蛋白有关。
关键词：槲皮素;;泡沫细胞;;焦亡;;动脉粥样硬化
基金资助：常州市“十四五”卫生健康高层次人才培养工程人才(2022CZBJ082)
