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作者：麦根宁;黎淼;潘兆丰;肖嘉聪;李卫鸿;黎晓轩;曾嘉旭;周驰;王海彬;
单位：广州中医药大学第一临床医学院;广州中医药大学第一附属医院中医证候全国重点实验室;广东药科大学中医学院;广州中医药大学第五临床医学院;广州中医药大学第一附属医院骨科;茂名市中医院骨伤科;
摘要：目的 探究柚皮素治疗骨关节炎的潜在作用机制。方法 采用Targenet、GeneCards、FerrDb等数据库筛选柚皮素、骨关节炎、铁死亡相关靶点；Cytoscape软件构建“通路-靶点”网络；R软件进行GO、KEGG分析；Autodock Vina、PyMol软件进行柚皮素与核心靶点的分子对接及可视化。采用CCK-8法检测软骨细胞活性；甲苯胺蓝染色法鉴定软骨细胞并观察其生长状态；荧光法检测细胞ROS、lipid ROS水平；试剂盒检测软骨细胞内GSH、MDA水平；Western blot法检测细胞Col2、MMP3、MMP13、Bax、Bcl-2、Gpx4、SLC7A11、Sirt1、Nox4蛋白表达。结果 筛选出药物靶点555个、铁死亡靶点671个、疾病靶点5 946个、交集靶点共41个，核心靶点主要包括PPARG、EGFR、GSK3B、PTGS2、Sirt1、RELA、PARP1、MDM2等。GO富集分析显示，生物学过程主要与细胞对化学应激的反应、细胞对氧化应激的反应等有关，细胞组分主要与膜筏、膜微域有关，分析功能主要与RNA聚合酶Ⅱ特异性DNA结合转录因子结合、DNA结合型转录因子结合、蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶活性有关，而KEGG分析主要富集在松弛素信号通路、活性氧信号通路、FoxO信号通路等。细胞实验表明，与IL-1β组比较，IL-1β+柚皮素-H组软骨细胞凋亡减少(P<0.01),软骨细胞活性增加(P<0.01);软骨细胞ROS、lipid ROS水平降低(P<0.01);细胞MDA水平降低(P<0.01),GSH水平升高(P<0.01);Col2、Bcl-2、Gpx4、SLC7A11、Sirt1蛋白表达升高(P<0.01),MMP3、MMP13、Bax、Nox4蛋白表达降低(P<0.01)。分子对接显示，活性成分与核心靶点Nox4、Sirt1有较好的结合。结论 柚皮素可能通过调控Sirt1/Nox4信号通路抑制软骨细胞铁死亡，发挥治疗骨关节炎的作用。
关键词：柚皮素;;骨关节炎;;铁死亡;;网络药理学;;细胞实验;;Sirt1/Nox4信号通路;;活性氧;;氧化应激
基金资助：广东省自然科学基金项目(2024A1515012062);; 广州市科技项目(2023B03J0056);; 广东省中医药管理局项目(20254028);; 茂名市科技项目(2023SZX022)
