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作者：陈莫斯楠;俸云;王燕新;王云;贾茹茹;周东平;石德顺;陆凤花;
单位：广西大学动物科学技术学院亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室;广西大学动物科学技术学院广西畜禽繁育与疾病防控重点实验室;
摘要：本研究旨在对水牛的m6A(N6-methyladenosine）甲基转移酶METTL3(Hyltrmetansferase-like 3）基因进行克隆及分析，并构建其真核表达载体，为探究METTL3在水牛克隆胚胎发育过程中的功能提供实验基础。使用RT-PCR技术对水牛卵巢提取的总RNA进行扩增，并对获得的目的片段进行生物信息学分析。结果显示，水牛METTL3基因的编码序列长度为1 751 bp，编码570个氨基酸。水牛METTL3基因氨基酸序列与牦牛、黄牛、山羊、绵羊、猪、马、人、黑猩猩、家鼠同源性分别为98.75%、98.75%、97.95%、98.06%、95.04%、94.47%、93.28%、93.16%、87.60%，且在不同物种之间具有较高的保守性。水牛METTL3基因编码的蛋白质分子式为C_(2784)H_(4447)N_(805)O_(837)S_(21)，属不稳定的亲水性蛋白；蛋白质二级结构主要由214段α-螺旋（37.54%）、86段延展链（15.09%）、36处β-转角（6.32%）和234个无规则卷曲结构（41.05%）组成；共有67个磷酸化位点，主要集中在苏氨酸（27个）、丝氨酸（33个）和酪氨酸（7个），并且无信号肽和跨膜位点。蛋白质三级结构在水牛、黄牛和人之间有较高相似性。本研究构建了水牛pc DNA3.1-EGFP-METTL3真核表达载体，并将其分别转染至水牛耳部成纤维细胞（BFFs）和HEK293T细胞，结果发现：BFFs和HEK293T细胞中METTL3的表达水平均显著升高。本试验克隆得到了水牛METTL3基因，且构建的真核表达载体pc DNA3.1-EGFP-METTL3能在BFFs和HEK293T细胞中成功表达。
关键词：水牛;METTL3基因;基因克隆;载体构建
基金资助：广西自然科学基金项目（2020JJD130069）; 国家自然科学基金项目（32160788）
