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作者：王丹丹;于畅;李雯倩;李红霞;陈广振;李佳;张金龙;马志禹;
单位：扬州大学兽医学院;扬州大学江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心;
摘要：神经介素B(Neuromedin B,NMB)作为一种重要的神经肽，参与调节摄食、激素分泌、细胞生长和生殖等多种生物学作用。本研究旨在克隆山羊NMB基因并进行序列分析，检测NMB基因和蛋白在山羊体内的表达情况。根据山羊NMB基因的预测序列（XM＿005695000.3），设计并合成能扩增包括CDS区的全长序列的扩增引物；通过PCR扩增获得山羊NMB基因片段，克隆获得pMD19-T-NMB重组质粒；利用生物信息分析软件或网址，对山羊NMB核苷酸和氨基酸序列进行分析；通过实时荧光定量PCR(qPCR)和蛋白质印迹法（Western Blot,WB）检测NMB mRNA和蛋白在山羊组织中的表达情况。结果成功克隆出506bp的山羊NMB基因，包括366bp的CDS序列，编码121个氨基酸，成熟肽为NMB-32，保守序列为NMB-10(GNLWATGHFM)；山羊与绵羊、牛、猪、大鼠、小鼠、人和鸡的成熟肽均为NMB-32，都包括相同的NMB-10；山羊与绵羊NMB核苷酸和氨基酸同源性相对较高，遗传进化的关系较为接近，与大鼠、小鼠和鸡的同源性相对较低，遗传进化的关系相对较远；山羊NMB氨基（N-）端24个氨基酸为预测信号肽；NMB蛋白预测的二级结构中α-螺旋、延伸链、β-转角和无规则卷曲占比分别为43.80%、13.22%、5.79%、37.19%，与其预测的三级结构一致；山羊NMB蛋白除与其受体NMBR互作外，与其他蛋白也可能存在互作；NMB mRNA和蛋白在山羊中枢神经系统和多个外周组织器官中均有表达，其中，NMB mRNA在垂体、小脑、下丘脑、尾状核、胰腺、卵巢和十二指肠等中的表达较高；NMB蛋白在小脑、大脑、尾状核、海马、皱胃、瘤胃、回肠、胰腺和生殖相关器官中有较高表达。本试验成功克隆了山羊NMB基因，检测了NMB在山羊体内的表达模式，为探索NMB在山羊上的功能提供了基础。
关键词：神经介素B;基因克隆;序列分析;组织表达;山羊
基金资助：国家自然科学基金项目（31802149）; 江苏高校优势学科建设工程资助项目（PAPD）; 扬州大学大学生科技创新资助
