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作者：张学丽;史茜;查贺飞;张新;
单位：石河子大学医学院;新疆生产建设兵团医院(石河子大学医学院第二附属医院)检验科;兵团医学检验临床医学研究中心;
摘要：目的 构建基于表面增强拉曼散射(SERS)与侧流免疫层析技术(LFIA)串联的碳青霉烯酶型(KPC、NDM、OXA-48)检测方法。方法 采用3种具有拉曼特征峰(1 629 cm~(-1)、1 078 cm~(-1)和539 cm~(-1))的Au@Ag核壳纳米材料作为SERS增强基底，分别偶联KPC、NDM和OXA-48的单克隆抗体制备免疫纳米标签，以LFIA试纸条检测线(T线)处包被的单克隆抗体作为捕获抗体，通过系统优化抗体配对方式及工作浓度，构建双抗体夹心的SERS-LFIA检测体系。应用拉曼光谱仪分析T线处的拉曼特征峰信号，建立数字化结果判读方法。系统评价该检测体系的灵敏度、特异性、重复性及钩状效应，并结合临床样本检测，验证其与聚合酶链式反应(PCR)和商品化胶体金试剂盒检测的符合率，评价诊断效能。结果 建立了基于SERS-LFIA的碳青霉烯酶型检测方法，可特异性识别KPC、NDM和OXA-48主要酶型，目视检测灵敏度均为5 ng/ml，依托拉曼光谱仪可提升检测灵敏度至1 ng/ml(KPC和OXA-48)；钩状效应临界浓度为125 ng/ml；低、中、高浓度抗原重复性检测的变异系数(CV)均<10%。以PCR检测结果为金标准评价该方法的诊断灵敏度和诊断特异性均为100.00%，与商品化胶体金检测试剂盒检测结果符合率为100.00%。结论 本研究建立的基于SERS-LFIA的碳青霉烯酶型检测方法灵敏、特异，重复性好，可在临床推广应用，旨在为耐药菌的防控提供基于双重技术支撑的临床检验诊断学依据。
关键词：碳青霉烯酶;;分类鉴定;;表面增强拉曼散射;;侧流免疫层析法;;快速检测
基金资助：国家临床重点专科建设项目（兵财社[2023]16号）;; 兵团重点领域科技攻关计划资助项目（2024AB072）;; 新疆生产建设兵团医院基础研究项目（2024008）
