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作者：刘燕;马德寿;
单位：青海大学附属医院乳腺甲状腺肿瘤外科;
摘要：目的 分析乳腺癌细胞外泌体微小RNA(miR)-224-5p靶向Smad4对内皮细胞增殖、迁移及血管生成的影响。方法 体外培养人乳腺癌细胞株(MDA-MB-231)、人脐静脉内皮细胞株(HUVECs),将MDA-MB-231细胞分为正常对照组(不处理),mimic NC组(转染negative control-miR-224-5p质粒)及miR-224-5p mimic组(转染miR-224-5p mimic质粒),收集各组MDA-MB-231细胞外泌体。HUVECs分别加入各组MDA-MB-231细胞外泌体，记为对照组、阴性对照组及miR-224-5p组。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测MDA-MB-231细胞外泌体中miR-224-5p、Smad4 mRNA水平；双荧光素酶报告基因实验验证miR-224-5p与Smad4的靶向关系；噻唑蓝(MTT)法检测HUVECs细胞增殖；Transwell法检测HUVECs细胞迁移；基质胶成管实验检测HUVECs细胞成管能力；Western印迹检测Smad4、血管内皮生长因子(VEGF)、细胞外信号调节激酶(ERK)、蛋白激酶B(Akt)蛋白表达。结果 mimic NC组及正常对照组MDA-MB-231细胞外泌体Smad4 mRNA及蛋白、miR-224-5p水平差异无统计学意义(P>0.05);与mimic NC组及正常对照组比较，miR-224-5p mimic组MDA-MB-231细胞外泌体Smad4 mRNA及蛋白水平明显下降，miR-224-5p水平明显升高(P<0.05)。miR-224-5p与Smad4存在结合位点，且在HUVECs细胞中存在靶向关系。miR-224-5p组HUVECs细胞Smad4蛋白水平均明显低于对照组、阴性对照组，OD450值、迁移细胞数、管腔形成数、VEGF、p-ERK/ERK及p-Akt/Akt蛋白水平均明显高于对照组、阴性对照组(P<0.05)。结论 MDA-MB-231外泌体miR-224-5p可通过靶向抑制Smad4表达，促进HUVECs增殖、迁移及血管形成。
关键词：乳腺癌细胞;;外泌体;;微小RNA-224-5p;;Smad4;;内皮细胞;;血管生成
基金资助：青海省科技厅应用基础研究项目(2019-ZJ-7091)
